ارزيابي خاصيت ضد قارچي عصاره گياه رزماري و تاثير آن در بيان ژن AFL1 قارچ آسپرژيلوس فلاووس با استفاده از روش Real-Time PCR

Assessment of antifungal activity of Rosemary oil extract and its effect on AFL1 gene expression in Aspergillus flavus by Real-Time PCR

سابقه و هدف: رزماري گياه دارويي مهمي است كه تاكنون خاصيت ضد ميكروبي آن بر روي قارچ هاي بيماري زا و توكسين زا كمتر مورد توجه قرار گرفته است. دست يابي به گياهان دارويي، با توجه به محدود بودن داروهاي ضد قارچي و مقاومت حاصل از آنها مي تواند حائز اهميت باشد. اين مطالعه با هدف ارزيابي خاصيت ضد قارچي عصاره گياه رزماري بر روي قارچ هاي آسپرژيلوس فلاووس، كانديدا آلبيكنس، اپيدرموفايتون فلوكوزوم، ترايكوفايتون وروكوزوم و تاثير اين عصاره در بيان ژن 1 AFL قارچ آسپرژيلوس فلاووس با استفاده از روش Real -Time PCR انجام شد. مواد و روش ها: در ابتدا قارچ هاي آسپرژيلوس فلاووس و كانديدا آلبيكنس بر روي محيط سابرودكستروز آگار و درماتوفيت هاي ترايكوفايتون وروكوزوم و اپيدرموفايتون فلوكوزوم بر روي محيط مايكوسل آگار با تراكم نيم مك فارلند كشت داده شدند. خاصيت ضد قارچي گياه رزماري با روش انتشار در ديسك ارزيابي گرديد. سپس غلظت موثر عصاره رزماري به كمك ده لوله استاندارد و محيط مايع سابرودكستروز براث محاسبه شد. در نهايت تاثير عصاره بر بيان ژن 1 AFL با روش RT-PCR مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: عصاره رزماري بر روي انواع گروه هاي قارچي اثر بازدارندگي داشت. به طوري كه متوسط قطر هاله عدم رشد حدود 16 تا 18 ميلي متر تعيين گرديد. MIC موثر براي قارچ كانديدا آلبيكنس 4 تا 6 ميلي گرم بر ميلي ليتر، براي قارچ آسپرژيلوس فلاووس 3 تا 5 ميلي گرم بر ميلي ليتر و براي درماتوفيت هاي ترايكوفايتون وروكوزوم و اپيدرموفايتون فلوكوزوم نيز 4 تا 6 ميلي گرم بر ميلي ليتر تعيين شد. همچنين نتايج Real -Time PCR نيز مهار ژن توليد كننده آفلاتوكسين را در سطح مولكولي به خوبي به اثبات رسانيد. نتيجه گيري: نتايج نشان داد كه عصاره رزماري مي تواند رشد قارچ ها را مختل نمايد و به طور قابل توجهي تاثير مهاركنندگي بر بيان ژن 1 AFL و توليد آفلاتوكسين در قارچ آسپرژيلوس فلاووس دارد.

Background & Objectives: Rosemary is a very important medicinal herb which its effect on toxin-causing and pathogenic fungi is not studied very well. This study was aimed to investigate the antifungal effect of the extract of Rosemary extract on various fungal groups including Aspergillus flavus, Candida albicans, Epidermophyton floccussom, Trichophyton verrucosum and its effect on AFL1 gene expression in A. flavus using real-time PCR method. Achieving an effective herbal medicine can be significant due to the limited amount of antifungal drugs and the prevalence of antifungal drug resistance. Materials & Methods: First of all A. flavus and C. albicans were cultured on sabouraud dextrose agar (SDA) media and T. verrucosum and E. floccosum were cultured on Mycocell agar media with 0.5 McFarland turbidity standard. Antifungal property of the rosemary extract was investigated using disk diffusion test. Then, the effective Rosemary extract concentration was evaluated using 10 standard tubes and sabouraud dextrose broth. Finally, the effect of Rosemary extract on AFL1 gene expression was examined. Results: Our results indicated that Rosemary extract has an inhibitory effect on various types of fungi so that the mean diameter of the inhibition zone was measured as about 16 to 18 mm. The effective MCI for C. albicans was observed as approximately 4 to 6 mg / L, for A. flavus as 3 to 5 mg /L and for E. floccosum and T. verrucosum as 4 to 6 mg /L. RT-PCR analysis confirmed the inhibitory effect of Rosemary extracts on aflatoxin- producing AFL1 gene expression at the molecular level, very well. Conclusion: The extract of Rosemary can have a considerable inhibitory effect on fungal growth, AFL1 gene expression and aflatoxin production in A. flavus.