بيان اپيتوپ G1 از ژن گليكوپروتئين G ويروس تب بي دوام گاوي توسط سازه نوتركيب pET24-G1 در اشرشياكلي

Expression of the G1 epitope of bovine ephemeral fever virus G glycoprotein gene by pET24-G1 recombinant construct in Escherichia coli

تب بيدوام گاوي (BEF) يك بيماري ويروسي در گاو و گاوميش است كه در سالهاي اخير در برخي از استانهاي ايران به ويژه مناطق جنوبي و گرم ديده شده است. گليكوپروتئين G، آنتيژن اصلي حفاظتي ويروس تب بيدوام گاوي (BEFV) و هدف آنتيباديهاي خنثي كننده ضدويروسي است. هدف از مطالعه­ي حاضر، كلونينگ و بيان اپيتوپ G1 از ژن گليكوپروتئين G ويروس BEF در يك سيستم پروكاريوتي بود. به اين منظور، اپيتوپ G1 درون ناقل بياني پروكاريوتي (+)pET-24a، تحت كنترل پروموتر T7، كلون و سپس سازه­ي نوتركيب pET24-G1 به سويه­ي Rosetta اشرشياكلي منتقل شد. بيان پروتئين نوتركيب با استفاده از روشهاي SDS-PAGE و ايمونوبلات بررسي شد. در آناليز SDS-PAGE پروتئيني با وزن مولكولي تقريبي 18 كيلو دالتون رويت شد كه با وزن مورد انتظار براي پروتئين نوتركيب متصل به دنباله­ي 6 تايي هيستيدين هم­خواني داشت. آناليز ايمونوبلات نشان داد كه پروتئين G1 بيان شده به طور اختصاصي با سرم پلي كلونال موشي حاوي آنتيبادي ضد BEF واكنش داد. بنابراين در اين مطالعه پروتئين G1 از ويروس BEF با موفقيت توسط سازه­ي نوتركيب pET24-G1 در اشرشياكلي بيان شد. براساس نتايج اين مطالعه مي­توان ايمني­زايي و كارآيي اين محصول را به عنوان كانديد احتمالي جهت توليد يك واكسن زيرواحدي عليه اين ويروس در مدل­هاي حيواني بررسي نمود.

Bovine ephemeral fever (BEF) is a viral disease of cattle and water buffalo seen in some provinces of Iran, generally southern and warm regions in recent years. The G glycoprotein is the main protective antigen of the bovine ephemeral fever virus (BEFV) and the target of anti-BEFV neutralizing antibodies. The aim of the present study was cloning and expression of the G1 epitope of BEF virus G glycoprotein gene in a prokaryotic system. For this purpose, the G1 epitope was cloned in a prokaryotic expression vector, pET-24a(+), under the control of the T7 promoter and subsequently the recombinant pET24-G1 construct was transformed into Rosetta strain of Escherichia coli. Expressed recombinant protein was analyzed using SDS-PAGE and immunoblotting methods. SDS-PAGE analysis showed that a protein with ~18 kDa molecular weight, consistent with the expected molecular weight of recombinant protein fused to 6xHis tag, was expressed. Immunoblotting analysis showed that the expressed G1 protein specifically reacted with a mouse polyclonal serum against BEFV. Thus, in this study the G1 protein of BEFV was successfully expressed by the pET24-G1 recombinant construct in Escherichia coli. Based on the results of this study, immunization and the efficacy of this product can be consider as a possible candidate for the production of subunit vaccine against the virus in animal models.