تايپينگ جدايه هاي ايراني پاستورلا مولتوسيداي گوسفندي و طيور ، بر اساس 4 ژن (L1-L4) بيوسنتز كننده هسته خارجي LPS

Typing ovine and avian Pasteurella Multocida isolates from Iran based on LPS outer core biosynthesis loci (L1-L4)

پاستورلا مولتوسيدا يك پاتوژن گرم منفي است كه موجب بيماري در حيوان و انسان مي­شود. وباي مرغي و پاستوريولوز گوسفندي از عفونت­هاي مهم پاستورلامولتوسيدا مي­باشد كه ضرر و زيان­هاي اقتصادي زيادي را به صنعت دامپروري وارد مي­سازد. عوامل حدت مختلفي در اين باكتري شناسايي شده­اند كه ليپوپلي­ساكاريد جزء مهم­ترين فاكتورهاي بيماري­زاي آن محسوب مي­شوند. هدف از تايپينگ LPS بررسي اختلاف سويه­هاي پاستورلا مولتوسيدا بر اساس ژنتيك سنتز LPS مي­باشد. براي انجام تايپينگ مولكولي از كشت خالص هر جدايه با روش جوشاندن، استخراج DNA ژنومي انجام شد و 32 جدايه پاستورلامولتوسيداي گوسفندي و 30 جدايه از طيور با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژنوتايپينگ ليپوپلي­ساكاريدي به وسيله­ي PCR، تعيين ژنوتيپ شدند. سپس، توالي نوكلئوتيدي محصولات PCR از هر ژنوتيپ مشخص و ارتباط آن­ها با توالي­هاي موجود در بانك ژن مقايسه گرديد. نتايج نشان داد از 32 جدايه­ي گوسفندي، 10 جدايه داراي ژنوتيپ L3 (25/31 درصد) بودند. در جدايه­هاي طيور نيز 18جدايه داراي ژنوتيپ L1 (60 درصد) و 4 جدايه داراي ژنوتيپ L2 (33/13 درصد) و 5 جدايه داراي ژنوتيپ L3 (66/16 درصد) و 2 جدايه داراي هر سه ژنوتيپ L1,L2,L3 (66/6 درصد) و 1 جدايه داراي دو ژنوتيپ L2, L3 (33/3 درصد) بودند. از چهار ژنوتيپ ليپوپلي­ساكاريد پاستورلا مولتوسيدا، جدايه­هاي گوسفندي تنها داراي ژنوتيپ L3 بودند ولي در مقابل، جدايه­هاي طيور داراي ژنوتيپ­هاي L3, L2, L1 بودند و هر دو ميزبان فاقد ژنوتيپ L4 بودند. اين نتايج نشان مي­دهد كه فراواني و پراكندگي ژنوتيپ­هاي LPS بسته به نوع ميزبان متفاوت مي­باشد. در مقايسه نتايج توالي نوكلئوتيدي جدايه­هاي بومي ايران با جدايه­هاي موجود در بانك ژن يك اختلاف قابل توجه در ژنوتيپ L3 و به ميزان كم­تر در ژنوتيپ L1, L2 ديده شد.

Pasteurella multocida is a negative gram pathogenic bacteria that causative agent of many diseases in animals and man. Fowl cholera and ovine pasteurellosis are of the most common infection of P. multocida that these diseases economic damage entered into the livestock industry. Different virulence factors of P. multocida have been introduced that LPS have an important role in virulence of the organism. The aim of LPS typing is determination differences between P. multocida strains based on LPS synthesis genetics. For perform molecular typing, DNA extraction was done with the using of a boiling method of each bacterial isolate culture and genotyping done on 32 ovine isolate and 30 avian isolates by PCR with using of specific primers for LPS genotyping experiment. The amplified LPS genes by PCR, then were sequenced and compared to the sequences deposited in the GenBank database from the world. Of the 32 ovine isolates only 10 isolates were contained L3 genotype (%31.25) and of 30 avian isolates 18 isolates were contained L1 genotype (%60), 4 isolates contain L2 genotype (%13.32), 5 isolates contain L3 genotype (%16.66), 2 isolates contain all three genotypes L1, L2, L3 (%6.66), 1 isolate contain both genotype L2, L3 (%3.33). Of the 4 genotypes, ovine isolates were only contain L3 genotype in against, avian isolates were contained L1, L2, L3 genotypes that this was indicated the distribution of LPS genotypes is different based on host type. The sequencing results of Iranian isolates with GenBank isolates showed a significant difference in L3 genotype and less difference in L1, L2 genotypes.