بررسي بي ضرري انتروكوك هاي پروبيوتيكي بومي جدا شده از محصولات شيري و شير انسان با استفاده از روش هاي بيوشيميايي و مولكولي

Evaluating the Safety of Indigenous Enterococcus species isolated from dairy products and Breast milk by Biochemical and Molecular Methods

هدف از اين مطالعه، تعيين بي ضرري و ايمني گونه هاي انتروكوك جدا شده از شير بز، پنير سنتي و نمونه هاي شير مادر بود. نمونه هاي انتروكوكوس جدا شده به وسيله ويژگي هاي فنوتيپي و تعيين توالي 16srRNA تا سطح جنس شناسايي شدند و خواص پروبيوتيكي آن ها، زنده ماني در شرايط اسيدي و حضور در درصدهاي مختلف نمك صفراوي در زمان هاي مختلف بررسي گرديد. فعاليت ضد ميكروبي اين باكتري ها بر عليه باكتري هاي بيماري زا و مقاومت آن‌ها نسبت به انواع آنتي بيوتيك ها نيز ارزيابي شد. جهت بررسي بي ضرري انتروكوكوك هاي شناسايي شده، حضور يا عدم حضور تعدادي از ژن هاي ويرولانس(asa1, hyl, esp, agg, gelE, cylA, cylB, cylM, efaAfm, efaAfs) و مقاومت به ونكومايسين (vanA, vanH, vanR , vanY ) با استفاده از روش هاي بيوشيميايي و مولكولي سنجيده شد. مقاومت فنوتيپي انتروكوك هاي انتخاب شده در برابر ليپاز، DNase و هموليز گلبول هاي قرمز نيز تعيين گرديد. نتايج اين تحقيق خصوصيات پروبيوتيكي بعضي از اين گونه ها را مشخص كرد. 4 جدايه تحمل اسيد و نمك صفرا را نشان دادند و اثرات ضد ميكروبي چشمگيري داشتند. تمامي سويه هاي انتروكوكوس فاسيوم جدا شده از شير مادر فاقد ژن هاي ويرولانس بودند. در آزمايشات فنوتيپي ويرولانس در سويه ها، همه سويه ها از نظر فعاليت هموليزي آلفاهموليتيك بودند. همه سويه ها به تتراسايكلين، سفالوتين، آموكسي سيلين، سفازولين و داكسي سايكلين حساسيت نشان دادند و همه آن ها به جز سويه TA00154، نسبت به ناليديكسيك اسيد و تري متوپريم سولفامتاكسازول، مقاوم بودند.

Enterococcus plays an important role in various industries. Some Enterococci isolated from dairy and breast milk has been reported as probiotics. However, these species selected as starter cultures or as probiotics should be evaluated for their safety and the absence of different virulence traits including virulence genes and antibiotic resistance. The aim of this study was to determine the safety of locally isolated Enterococcus species biochemically and targeting essential virulence genes by PCR method. A number of suspected Enterococcus species isolated from ewe milk, traditional cheese and mothers' milk were identified to genus level by phenotypic characteristics and 16SrRNA sequencing. The selected isolates were screened for their probiotic properties by determining their acid and bile resistance, antibacterial activity against a number of pathogens and antibiotic resistance. Phenotypic virulence parameters including lipase, DNAse and hemolysis of red blood cells, was determined. The presence or absence of a number of virulence genes including asa1, hyl, esp, agg, gelE, cylA, cylB, cylM, efaAfm, efaAfs and vancomycin resistance genes including vanA, vanH, vanR and vanY was evaluated. The results of this study determined the probiotic properties of some of these species. Four isolates showed acid and bile salt tolerance and showed significant antimicrobial effects. All isolates from Breast milk, lacked virulence genes. In virulance phenotypic experiments, all strains were alpha hemolytic. All strains were susceptible to Tetracycline, Cephalothin Amoxicillin, Cefazolin and Doxycycline and all of them except the TA00154 strain, were resistant to Nalidixic acid and Trimethoprim sulfamethoxazole.