تعيين ميزان پاتولين آب سيب با تكنيك ريزاستخراج مايع - مايع پخشي به همراه دستگاه كروماتوگرافي مايع با عملكرد بالا و بهينه سازي به كمك روش سطح پاسخ

Determination of patulin in apple juice samples using dispersive liquid-liquid microextraction followed by high performance liquid chromatography and method optimization using response surface methodology

سابقه و هدف: پاتولين در سال 1970 توسط آژانس بين المللي تحقيقات سرطان به عنوان يك «ماده ي سرطان زاي احتمالي براي انسان» طبقه بندي شد. براساس گزارشات كميته ي مشترك متخصصان FAO / WHO - JECFA بيشترين مقدار مجاز مصرف پاتولين در آب سيب 0/4 ميكروگرم به ازاي هر كيلوگرم وزن بدن در روز اعلام شده است. در اين مطالعه كارايي روش جهت تعيين ميزان پاتولين در چند نمونه از آب سيب هاي موجود در مناطق مختلف شهر اراك بررسي شد. مواد و روش ها: بهينه سازي متغيرهاي موثر در استخراج پاتولين به كمك شيوه ي سطح پاسخ و طرح مركب مركزي انجام پذيرفت كه شامل 30 آزمايش طراحي شده براي 4 متغير در 5 سطح بود. به منظور معتبر سازي روش پيشنهادي ارقام شايستگي روش محاسبه گرديد. مقدار پاتولين موجود در چند نمونه از آب سيب هاي تهيه شده از سوپرماركت هاي مختلف شهر اراك با استفاده از روشIL-DLLME-HPLC تعيين گرديد. يافته ها: مقدار بهينه ي متغيرهاي موثر بر كارايي روش پيشنهادي تعيين شد. ارقام شايستگي روش پيشنهادي از جمله حد تشخيص 0/15 نانوگرم بر گرم و انحراف استاندارد نسبي 7/5 درصد، قابل مقايسه و يا در مواردي بهتر از روش هاي ديگر مي باشند. كارايي روش پيشنهادي در نمونه هاي حقيقي به خوبي اثبات گرديد. نتيجه گيري: نتايج به دست آمده به خوبي ثابت كرد كه تكنيك IL-DLLME-HPLC توانايي بسيار بالايي جهت تعيين مقادير بسيار كم پاتولين در نمونه هاي آب سيب را دارا مي باشد.

Background and Objective: Patulin was classified as a possible human carcinogen by the International Agency for Research on Cancer in 1970. Owing to its toxicity، the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives has established a provisional maximum tolerable daily intake for patulin in apple juice of 0.4 µg kg−1 body weight per day. The present study examined efficient methods for the determination of the amount of patulin in different brands of apple juice purchased in different districts of the city of Arak. Materials and Methods: Optimization of effective parameters for extraction of patulin was carried out using response surface methodology based on a central composite design that included 30 treatments at 5 levels for 4 factors with 6 replicates for the center point. The proposed method was validated using figures of merit. The amount of patulin was determined by the proposed IL-DLLME-HPLC method in apple juice samples available at different supermarkets in Arak. Results: Optimum amounts for effective parameters were determined using the proposed method. The figures of merit for the proposed method were comparable to or better than other methods. The performance of the proposed method was well-demonstrated by analysis of real samples. Conclusion: The results of the present study demonstrated that IL-DLLME-HPLC is a powerful method for monitoring the presence of patulin، even at very low concentrations، in apple juice samples.