شناسايي سريع باكتري كمپيلو باكتر ژژوني بر اساس واكنش PCR و ارزيابي حساسيت و اختصاصيت آن

Rapid Detection of Campylobacter jejuni by Polymerase Chain Reaction and Evaluation of its Sensitivity and Specificity

مقدمــه: كمپيلوباكتــر ژژونــي از عوامــل اصلــي و شــايع مســموميت غذايــي در انســان اســت. شناســايي ســريع و اختصاصــي ايــن باكتــري نقــش مهمــي در تشــخيص و درمــان عفونــت ايفــا مي كنــد. هــدف از ايــن مطالعــه اختصاصــي بــه منظــور شناســايي كمپيلــو باكتــر ژژونــي مي باشــد. PCRطراحــي واكنــش روش كار: در ايــن مطالعــه تجربــي ژن اكســيدو ردوكتــاز از باكتــري كمپيلــو باكتــر ژژونــي جهــت شناســايي ســريع و اختصاصــي ايــن باكتــري انتخــاب گرديــد. پرايمرهــاي اختصاصــي جهــت ايــن كار، طراحــي و خصوصيات باكتــري بــا روش فنــل كلروفــرم اســتخراج DNAآن توســط نــرم افزارهــاي بيــو انفورماتيكــي بررســي گرديــد. PCR گونــه باكتــري بررســي شــد. حساســيت واكنــش 6شــد. اختصاصيــت روش طراحــي شــده، بــا اســتفاده از بــا روش تهيــه ســريال رقــت از ژنــوم باكتــري محاســبه شــد. اختصاصــي ژن اكســيدوردوكتاز باكتــري كمپيلــو ً يافته هــا: نتايــج نشــان داد كــه پرايمــر طراحــي شــده كامــا جفــت بــازي تكثيــر مي شــود. ايــن پرايمــر بــا 167 تــك بانــد PCRباكتــر ژژونــي بــوده و پــس از انجــام ژنومــي DNA پيكوگــرم از 5 ژنــوم ديگــر گونه هــاي باكتريايــي جفــت نمي شــود. حــد تشــخيص ايــن واكنــش باكتــري مي باشــد. نتيجــه گيــري: روش بهينــه شــده در ايــن مطالعــه روشــي ســريع، حســاس و اختصاصــي بــه منظــور تشــخيص كمپيلــو باكتــر مي باشــد. بــه منظــور تأييــد نتايــج ايــن مطالعــه، تشــخيص باكتــري كمپيلــو باكتــر ژژونــي در نمونه هــاي مــواد غذايــي توصيــه مي شــود.

Introduction: Campylobacter jejuni is one of the most common causes of food poising in human. Rapid and specific detection of these bacteria has an important role in diagnosis and treatment of infection. The aim of this study was to design a specific PCR for the detection of Campylobacter jejuni. Methods: In this experimental study, oxidoreductase gene from the Campylobacter jejuni was selected for rapid and specific detection. For this purpose, specific primers were designed and charecterized by bioinformatics software. Bacterial genome was extracted by phenol-chloroform method and PCR was optimized to obtain a specific product. Specificity of the designed reaction was investigated using six bacterial species. The sensitivity of the PCR reaction was calculated by the serial dilutions method. Results: The designed primer was specific to oxidoreductase gene of Campylobacter jejuni and after optimization, a unique 167-bp band was amplified. This primer was specific to Campylobacter jejuni and did not show any cross reaction with other bacterial genomes. The detection limit of this reaction was 5 pg of genomic DNA. Conclusion: The optimized PCR used in this study was a rapid, sensitive, and specific method for detection of Campylobacter jejuni. For confirmation of this method, detection of C. jejuni from food samples is proposed.