فراواني گونه هاي آكانتامبا در آب استخرها و حوضچه هاي شهر خرم آباد و تعيين ژنوتيپ هاي آن درسال 1395

Frequency and Genotyping of Acanthamoeba Species in the Swimming Pools and Ponds of Khoramabad, Iran, in 2016

سابقه و هدف: آكانتامبا آميبي فرصت‌طلب ساكن آب، خاك و هوا است. اين آميب مي‌تواند در افراد داراي نقص سيستم ايمني باعث آنسفاليت آميبي گرانولوماتوز و در افرادي كه ازلنز تماسي چشم استفاده مي‌كنند ايجاد كراتيت آميبي كند. تعدادي از ژنوتيپ­هاي آكانتامبا بيماري‌زا و برخي غير بيماري‌زا هستند. اين مطالعه باهدف تعيين فراواني و شناسايي ژنوتيپ هاي آكانتامبا در آب استخرها وحوضچه­هاي شهر خرم آباد با روش‌هاي كشت، PCR و توالي يابي در سال 1395 انجام شد. مواد و روش‌‌ها: تعداد 84 نمونه از آب استخرها و حوضچه‌هاي خرم­آباد جمع‌آوري شد. نمونه‌ها از فيلترهاي سرنگي نيتروسلولز 0/45 ميكروني عبور داده شده و سپس فيلتر در محيط كشت آگار غيرمغذي 5/1 درصد پوشيده با باكتري كشته‌شده. اشريشيا كلي و دمايC°27كشت داده شدند. پس از استخراج DNA ازنمونه‌هاي مثبت،جهت شناسايي آكانتامبا واكنشPCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي صورت گرفت. به منظورتعيين ژنوتيپ­هاي آكانتامبا،محصول PCRنمونه‌هاي مثبت تعيين توالي گرديد. يافته‌ها: از84 نمونه آب جمع­آوري شده از استخرها و حوضچه­هاي شهر خرم­آباد تعداد 50 نمونه(59/5%) داراي نتيجه كشت مثبت بودند كه پس از استخراج DNA و انجام PCR 35 نمونه(41/7%) از نظر آكانتامبا مثبت بودند. پس از تعيين توالي محصولاتPCR، مشخص شد كه 17 نمونه داراي ژنوتيپT4 (48/57%) و 18 نمونه (51/42%) داراي ساير ژنوتيپ هاي آكانتامبا مي­باشند. نتيجه‌گيري: اين مطالعه نشان داد شيوع بالاي انواع آكانتامبا، بخصوص نوع بيماريزاي آن، در استخرهاي خرم آباد مي تواند منشاء آلودگي براي انسان باشد. حدود نيمي از ژنوتيپ­هاي يافت شده از نوع بيماري‌زا (ژنوتيپ T4) وعامل اصلي كراتيت آكانتامبايي مي­باشند. اين منابع آبي به‌عنوان عامل بالقوه خطر براي سلامت عمومي بوده و تلاش متصديان بهداشتي به‌منظورآموزش و پيشگيري از آلودگي ضروري است

Background and Objective: Acanthamoeba is a free-living and opportunistic amoeba found in the water, soil, and air. This amoeba causes granulomatous amoebic encephalitis in the immunocompromised patients and amoebic keratitis in the people using contact lenses. The genotypes of Acanthamoeba are pathogenic and non-pathogenic. Regarding this, the present study aimed to determine the frequency and genotypes of Acanthamoeba in the water pools and ponds of Khorramabad, Iran, using culture, polymerase chain reaction (PCR), and sequencing methods in 2016. Materials and Methods: This study was conducted on a total of 84 water samples collected from the water pools and ponds of Khorramabad. The samples were filtered using nitrocellulose syringe (0.45 μm); subsequently, they were cultured on 1.5% non-nutrient agar, covered by killed Escherichia coli and incubated at 27ºC. After the extraction of DNA from positive samples, PCR was performed using specific primers to detect and confirm Acanthamoeba. Then, for genotyping, the PCR products of positive samples were sequenced. Results: Out of the 84 water samples, 50 (59.5%) cases were positive for amoeba in the culture method. However, the results of the PCR revealed 35 (41.7%) positive samples for Acanthamoeba. The sequencing of the PCR products demonstrated that 17 samples were T4 genotype (pathogen), and the rest were other Acanthamoeba genotypes. Conclusion: This study indicated the high prevalence of Acanthamoeba species, especially the pathogenic type, in the water pools of Khoramabad that could be a source of infection risk for humans. Regarding the fact that almost half of the found genotypes were pathogenic (genotype T4) that are the main cause of amoebic keratitis, these water bodies could be a potential risk factor for the public health. Therefore, the health professionals should prevent contamination.