تشخيص ملكولي ژن‌هاي بيماري‌زا در سويه‌هاي ‌سودوموناس ‌آئروژينوزاي جداشده از نمونه‌هاي باليني با روش ‌Multiplex PCR

Molecular Detection of Virulence Genes among Pseudomonas aeruginosa Strains Isolated from Clinical Specimens by Multiplex PCR

سابقه و هدف: سودوموناس آئروژينوزا رايج‌ترين پاتوژن مرتبط با عفونت‌هاي بيمارستاني است كه داراي فاكتورهاي بيماري‌زايي نظير آلژينات، اگزوآنزيم S، اگزوتوكسين A و الاستاز كه در تهاجم و سميت باكتري مشاركت دارند مي‌باشد. در اين ارتباط، هدف از مطالعه حاضر شناسايي شيوع ژن‌هاي algD، exoS، toxA و lasB در سويه‌هاي سودوموناس آئروژينوزاي جداشده از بيماران با روش ملكولي Multiplex PCR (Multiplex Polymerase Chain Reaction) مي‌باشد. مواد و روش‌‌ها: در اين مطالعه مقطعي 60 نمونه باليني سودوموناس آئروژينوزا از بيمارستان‌هاي دي و مطهري تهران جمع‌آوري گرديد. پس از تأييد ايزوله‌ها با روش‌هاي بيوشيميايي، آزمون آنتي‌بيوگرام به روش ديسك ديفيوژن (Disk Diffusion) با آنتي‌بيوتيك‌هاي مختلف انجام شد. علاوه‌براين، واكنش Multiplex PCR جهت شناسايي ژن‌هاي مورد نظر به كار رفت. يافته‌ها: از 60 نمونه جمع‌آوري‌شده، 37 بيمار مرد (61/66 درصد) و 23 بيمار زن (38/34 درصد) داراي عفونت سودوموناس آئروژينوزا بودند. بيشترين سطح مقاومت آنتي‌بيوتيكي ايزوله‌هاي سودوموناس آئروژينوزا عليه سفترياكسون (93/33 درصد) مشاهده شد. ميزان شيوع ژن‌هاي بيماري‌زا در ايزوله‌ها نيز عبارت بود از:lasB (61/7 درصد)، toxA (60 درصد)، algD (3/43 درصد) و exoS (5 درصد). نتيجه‌گيري: الاستاز، اگزوتوكسين A و آلژينات فاكتورهاي مهم بيماري‌‍‌زاي سودوموناس آئروژينوزا هستند و نقش اصلي را در ايجاد بيماري‌ها و آسيب‌هاي بافتي و پوستي ايفا مي‌كنند

Background and Objective: Pseudomonas aeroginosa is the most common pathogen associated with nosocomial infections and possesses virulence factors which contribute to the bacterial invasion and toxicity such as alginate, exoenzyme S, exotoxin A and elastase. The aim of this study was to determine the prevalence of algD, exoS, toxA and lasB genes in Pseudomonas aeruginosa samples isolated from patients by Multiplex PCR. Materials and Methods: In this cross sectional study, sixty clinical samples were collected from Dey and Motahhari Hospitals, Tehran, Iran. Following identification of isolates by biochemical methods, Antibiogram test was performed using disc diffusion method with different antibiotics. Multiplex PCR method was performed to identify the desired genes. Results: 37 out of 60 (61.66%) male and 23 out of 60 (38.34%) female specimens were positive for pseudomonas aeruginosa. The highest level of antibiotic resistance of the Pseudomonas aeroginosa isolates was observed against ceftriaxone (93.33%). The prevalence rate of virulence genes among all isolates was as follows; lasB (61.7%), toxA (60%), algD (43.3%) and exoS (5%). Conclusion: Elastase, exotoxin A and alginate are considered important virulence factors of pseudomonas aeruginosa and they play a major role in causing diseases and tissue and skin lesions.