مقايسه بيان ژن نوكلئوكپسيد ويروس پژمردگي لكه اي گوجه فرنگي در دو سويه باكتري E. coli

Comparison of Tomato spotted wilt virus nucleocapsid gene expression in two different strains of E. coli

از آنجايي كه روش­هاي توليد آنتي بادي براي كاربرد در ويروس­ها داراي محدوديت­هايي مي­باشد، بيان پروتئين­ پوششي در سيستم پروكاريوتي به منظور توليد آنتي­ژن انجام مي­شود. در پژوهش حاضر ژن نوكلئوكپسيد ويروس پژمردگي لكه­اي گوجه فرنگي از يك جدايه بومي در ايران تكثير شده و پس از همسانه ­سازي، قطعه مربوط به ژن نوكلئوكپسيد در سازه pTG19TSWV-N با آنزيم­هاي BamHI و XhoI خارج شد و در حامل بياني pET32a(+) برش يافته با آنزيم­هاي BamHI وXhoI همسانه­ سازي شد. سپس، سازه pET32TSWV-N به سويه­ هاي BL21(DE3) و BL21(DE3) pLysS از باكتري E. coli انتقال يافت. بيان ژن نوكلئوكپسيد با استفاده از القاي پيشبر با غلظت يك ميلي­مولار IPTG در هر دو سويه صورت گرفت. چهار ساعت پس از القا، محيط­هاي كشت باكتريايي جمع ­آوري شدند و محتواي پروتئيني استخراج شده از دو سويه مذكور در الكتروفورز عمودي بررسي شدند. با توجه به وزن مولكولي پروتئين بيان شده به همراه برچسب­هايي كه از پلاسميد به پروتئين اضافه شده بود، پروتئيني به اندازه حدود 48 كيلودالتون در الكتروفورز عمودي مشاهده شد. نتايج اين تحقيق حاكي از بيان ژن نوكلئوكپسيد در دو سويه مذكور بود در حاليكه بيان پروتئين در سويه باكتريايي BL21(DE3) pLysS نسبت به BL21(DE3) بيشتر بود.

Because of limitations in antibody production against plant viruses, coat protein expression has been developed to prepare antigen for antibody production. In the recent research, Nucleocapsid gene of Tomato spotted wilt virus was amplified from a local strain in Iran. Cloned segment in TA vector (pTG19TSWV-N) was sub-cloned into pET32a as expression vector that digested by XhoI and BamHI. Then, pET32TSWV-N was transformed in two different strains of E. coli BL21(DE3) and BL21(DE3) pLysS by heat shock method. For protein expression, the transformed cells were induced by 1mM of IPTG in both strains. The protein was extracted four hours after induction and analyzed in SDS-PAGE. The SDS-PAGE result showed that a 48 kDa protein have been expressed that is expected based on additional tags from plasmid. The result revealed that nucleocapsid had been expressed in both strains whereas protein expression was little more in BL21(DE3) pLysS.