شناسايي گروه غالب ويروس اس سيب زميني (PVS) در ايران و بيان ژن پوشش پروتئيني آن

dentification of dominant isolate of Potato virus S in Iran and heterologous expression of its coat protein

بيان ژن ويروس­ها در باكتري­ براي مطالعه پروتئين ويروس­ها و توليد آنتي­بادي­ اختصاصي مورد استفاده قرار مي­گيرد. در اين پژوهش، نمونه ­هاي سيب­زميني از هشت استان ايران جمع ­آوري شده و رديابي ويروس Potato virus S، به عنوان يكي از مخرب­ترين ويروس­هاي سيب­زميني، بوسيله داس-اليزا و آرتي-پي­ سي­ آر انجام گرفت. تعيين گروه غالب با توجه به توالي ژن پوشش پروتئيني و پس از تجزيه فيلوژني انجام شد. ژن كامل CP تكثير و همسانه ­سازي شده و مورد توالي­ يابي قرار گرفت، سپس از پلاسميد pJET1.2/blunt برش داده شده و به پلاسميد بيان pET-28a (+) متصل شد و سازه (pET-28a:PVS:CP) به باكتري Escherichia coli سويه BL21 منتقل شد. بهينه ­سازي بيان ژن با القا بوسيله IPTG در غلظت­هاي 5/0، 1 و 2 mM به مدت 3، 4 و 6 ساعت انجام گرفت و توسط SDS-PAGE و وسترن بلات تاييد شد. بر اساس توالي نوكلئوتيدي، جدايه­هاي ايراني PVS به سه گروه تقسيم شدند كه يك گروه با 22 عضو به عنوان گروه غالب شناخته شد. بيان پروتئين نوتركيب با وزن 34 كيلودالتون توسط وسترن تاييد شد. القاء با غلظت 1 ميلي­ مولار IPTG و به مدت 4 ساعت بهترين بيان را نشان داد. اين نخستين گزارش بيان ژن پوشش پروتئيني ويروس PVS است كه براي تهيه آنتي­ بادي اين ويروس اهميت دارد.

Gene expression in bacteria have already been used to study the protein of viruses and to produce specific antibodies. In this research, potato samples were collected from eight provinces of Iran and were tested for Potato virus S, as one of the most destructive viruses of potato fields, by DAS-ELISA and RT-PCR. Dominant isolate of PVS was selected according to coat protein (CP) gene sequences following phylogenetic analysis. Full length CP gene was amplified, cloned and sequenced, then was digested from pJET1.2/blunt vector, ligated into the expression vector pET-28a and the construct (pET-28a:PVS:CP) was transformed into Escherichia coli BL21 strain. Gene expression was optimized by induction with 0.5, 1 and 2 mM final concentrations of IPTG for 3, 4 and 6 h and was verified by SDS-PAGE and Western blotting. Based on the nucleotide analysis, the Iranian isolates of PVS were divided into three groups that one group with 22 members known as the dominant group. The expression of recombinant CP of about 34 kDa was proved by western blotting. Induction by 1 mM IPTG for 4 h proved to be the most efficient method of expression. This is the first report of the expression of PVS CP gene, which is important for the preparation of anti-PVS antibody.