تاثير اسيد گاليك بر بيان ژن آلكالين فسفاتاز در سلول هاي عضلاني صاف ديواره رگ ها

Effect of Gallic Acid on Alkaline Phosphatase Gene Expression in Vascular Smooth Muscle Cells

سابقه و هدف: كلسيفيه شدن رگ‌ها يكي از عوامل مهم در پاتوژنز آترواسكلروز محسوب مي‌شود. مطالعات نشان داده است آنزيم آلكالين فسفاتاز فرآيند كلسيفيه شدن رگ‌ها را افزايش مي‌دهد. در اين مطالعه اثر اسيدگاليك بر بيان ژن آلكالين فسفاتاز در سلول‌هاي عضلات صاف عروق مورد بررسي قرار گرفته است. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، سلول‌هاي عضله صاف عروق آئورت انساني جهت القا كلسيفيه شدن، با بتاگليسرول فسفات مجاور گرديد. سپس اين سلول‌ها با غلظت‌هاي 160،180 و 200 ميكرومولار اسيدگاليك به مدت 24، 48 و72 ساعت تيمار شدند. بعد از استخراج RNA و سنتز cDNA، ميزان بيان ژن آلكالين فسفاتاز با روش Real Time PCR مورد سنجش قرارگرفت. هم‌چنين فعاليت ويژه آلكالين فسفاتاز درنمونه‌هاي مورد مطالعه به روش رنگ سنجي اندازه‌گيري شد. داده‌ها با نرم‌افزار SPSS و آزمون آماري نان پارامتريكMann-whitney آناليز و مقايسه شدند. يافته‌ها: نتايج نشان داد كه اسيد گاليك در غلظت‌هاي 160 و 180 و 200 ميكرومول پس از 72 ساعت ميزان بيان ژن آلكالين فسفاتاز القا شده با بتاگليسرول را در مقايسه با گروه كنترل به ترتيب 1/98، 2/03و 3/16بار كاهش داده است. فعاليت ويژه آلكالين فسفاتاز نيز پس از تيمار سلول‌ها نسبت به گروه كنترل كاهش نشان داده است. استنتاج: نتايج ما نشان داد، اسيد گاليك بيان ژن و فعاليت ويژه آلكالين فسفاتاز را كاهش مي‌دهد. لذا به نظر مي‌رسد اين تركيب آنتي‌اكسيداني احتمالاً با كاهش بيان آلكالين فسفاتاز باعث كاهش كلسيفيه شدن رگ‌ها مي‌گردد.

Background and purpose: Vascular calcification is an important factor in pathogenesis of atherosclerosis. Studies have shown that alkaline phosphatase increases vascular calcification. Here we investigated the effect of gallic acid on alkaline phosphatase gene expression in vascular smooth muscle cells (VSMCs). Materials and methods: In this experimental study humans aorta VSMCs were incubated with beta glycerol phosphate as calcification-inducing media. Then these cells were treated with 160, 180 and 200 µMol concentration of gallic acid for 24h, 48h and 72h. The total RNA was extracted and cDNA was synthesized and then alkaline phosphatase expression was measured by real time PCR. Alkaline phosphatase specific activity was measured by spectrophotometry. Results: Overall, 160, 180 and 200 µMol concentration of gallic acid decreased alkaline phosphatase gene expression in vascular smooth muscle cell by 1.98, 2.03, and 3.16 folds, respectively after 72h compared with the control group. The alkaline phosphatase specific activity also decreased compared to that of the control group. Conclusion: Our results showed that gallic acid decreased the expression and activity of alkaline phosphatase suggesting that this antioxidant compound may attenuate vascular calcification.