عنوان مقاله :
كلون‌كردن اپيتوپ‌هاي خطي آنتي‌ژن Eg95 اكينوكوكوس گرانولوزوس در وكتور pEGFP وبررسي بيان آن در سلول CHO
عنوان به زبان ديگر :
Cloning of linear epitopes of EG95 antigen of Echinococcusgranulosus in pEGFP vector and evaluation of gfp-ChEg95 expression in CHO cells
پديد آورندگان :
محمدي، سميه دانشگاه خوارزمي - دانشكده علوم زيستي - گروه علوم سلولي و مولكولي , اسمعيلي زاد، مجيد موسسه تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي , انگجي، عبدالحميد دانشگاه خوارزمي - دانشكده علوم زيستي - گروه علوم سلولي و مولكولي , طهماسب، محمد دانشگاه خوارزمي - دانشكده علوم زيستي - گروه سلولي و مولكولي , مصري، رقيه دانشگاه خوارزمي - دانشكده علوم زيستي - گروه سلولي و مولكولي , احمدزاده، مژگان دانشگاه خوارزمي - دانشكده علوم زيستي - گروه سلولي و مولكولي
كليدواژه :
اكينوكوكوس گرانولوزوس , كيست هيداتيك , اپيتوپ , Eg95 , DNA واكسن
چكيده فارسي :
زمينه و هدف: كيست هيداتيك، بيماريي است كه ازطريق تخم انگل اكينوكوكوس گرانولوزوس دفع‌شده از مدفوع سگ آلوده به انسان و دام منتقل‌مي‌شود. اين انگل، يكي از كرم‌هاي نواري خانواده‌ي Taeniidae مي‌باشد كه باعث ايجاد مشكلات بهداشتي گسترده در انسان و خسارت‌هاي اقتصادي به صنعت دامپروري مي‌شود. بدين منظور، طراحي واكسن به‌منظور پيشگيري ازبروز اين بيماري حائز اهميت مي‌باشد.
مواد و روش‌ها: در اين تحقيق، توالي‌هاي كدكننده‌ي اپيتوپ خطي تحريك‌كننده‌ي سلول‌هاي T، سنتز و در محل برش XhoI در وكتور pEGFP-N1 كلون‌شد. وكتورهاي نوتركيب توسط شوك الكتريكي به سلول‌هاي CHO ترانسفورم‌شدند و بيان پروتئين مورد نظر به‌صورت فيوژن با پروتئين سبز فلورسنت توسط ميكروسكوپ فلورسنت مورد بررسي قرارگرفت.
يافته‌ها: صحت كلونينگ باروش PCRمستقيم بر روي كلوني و درنهايت با روش توالي يابي تاييد گرديد. بيان پپتيد فيوژن با GFP توسط ميكروسكوپ فلورسنت مورد بررسي قرارگرفت.
نتيجه‌گيري: نتايج اين تحقيق نشان‌مي‌دهد كه اپيتوپ‌هاي خطي آنتي‌ژن Eg95كلون‌شده در وكتور pEGFP و در سلول CHO بيان-گرديده‌است. در ادامه مي‌بايست اين سازه DNA به حيوان مدل (موش) تزريق‌شده و پاسخ ايمني حيوان مورد بررسي قرارگيرد.
چكيده لاتين :
Background and purpose: Hydatidosis is a parasitic disease that transmits by Echinococcusgranulosus eggs excreted from the feces of infected dogs to humans and animals. This parasite is one of the tapeworms of the family Taeniidae which causes widespread health problems among humans and also economic loss in animal. Therefore, designing a new generation vaccine is important to prevent the disease.
Materials and methods: In this study, the linear T-cell epitopes were selected. The coding sequence of epitopes was synthesized and cloned to pEGFP-N1vector. The recombinant vector was transfected into CHO cells by genpulser. Expression of fusion Protein was confirmed by fluorescence microscopy.
Results: The accuracy of cloning was confirmed by both colony PCR on the clone and the subsequent sequencing. Fluorescence microscopy showed fusion protein was expressed in CHO.
Conclusion: The results showed that, linear T-cell epitope of EG95 antigen was cloned correctly in pEGFP vector and its expression confirmed that this recombinant vector can be used to construct a DNA vaccine model against the Echinococcusgranulosus.
عنوان نشريه :
فصلنامه دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني سبزوار
عنوان نشريه :
فصلنامه دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني سبزوار
