تهيه ميكروزوم و اندازه‌گيري پروتيين آن در نمونه‌هاي كبد انساني

Preparing Microsom and Measuring it's Protein in human liver samples

زمينه و هدف: آنزيم‌هاي سيتوكرومي نقش بسيار مهمي در متابوليسم دارو‌ها دارند. بيش از 96 درصد اين آنزيم‌ها در كبد وجود دارند. لذا، اندازه‌گيري پروتيين ميكرزوم‌ها جهت مشخص نمودن توانايي كبد در متابوليسم داروها و تعيين پارامترهاي فارماكوكينتيك مؤثّر خواهد بود. در اين مطالعه بعد از تهيه ميكروزوم، ميزان پروتيين آنها در نمونه‌هاي كبدي انسان مورد اندازه‌گيري قرار گرفت. مواد و روش‌ها:در اين مطالعه مشاهده اي 18 نمونه بافت كبدي سالم از بيماران تحت جراحي كبدي به صورت غير تصادفي و در دسترس تهيه شد. اين نمونه‌ها دربافر فسفات پتاسيم خرد گرديده و طي چندين مرحله سانتريفوژ، رسوب ميكروزومي استخراج شد. سپس مقدار پروتيين تام ميكروزمي با روش لوري اندازه‌گيري گرديد.داده هاي بدست آمده مورد تجزيه و تحليل روش هاي آمار توصيفي قرار گرفتند. يافته‌ها:نتايج مطالعه حاضر نشان داد كه مقدار پروتيين تام در نمونه هاي كبد بين 14/1 تا 27/2 ميلي گرم بر هر گرم از كبد متفاوت است. ميانگين پروتيين تام درنمونه‌هاي مورد آزمايش حدّود 3/77±20/24 ميلي گرم بر هر گرم است. لازم به ذكر است اين نتايج براي اوّلين باردرايران گزارش مي‌گردد. نتيجه‌گيري: آگاهي از مقدار پروتيين ميكروزوم‌هاي كبدي نقش بسيار مهمي در رابطه با توانايي كبدنژاد ايراني از حيث متابوليسم داروها دارد. لذا، اين پروژه اطّلاعات ارزشمندي در اختيار محقّقين قرار مي‌دهد. مقدار پروتيين موجود در ميكروزوم‌هاي كبدي در اين منطقه نسبت به ساير گزارش هاي بين المللي پايين مي باشد. اين پديده، مي‌تواند زنگ خطري براي پزشكان باليني از حيث كنترل دوز تجويز داروها به لحاظ توانايي پايين كبد در متابوليسم دارو و نهايتاً امكان بروز مسموميّت دارويي، باشد.

Background and purpose: In human cytochrome P450 (CYP), enzymes are responsible for the oxidative metabolism of many medicines. The greatest metabolism proportions are carried out by enzymes that are found in the liver. CYPs are located in the microsomes. For these reasons preparation of microsomes and measurement of their protein are very important to determine the potency of liver for metabolic elimination of drugs in humans. The aim of this project was to extract microsmes and determine levels of microsomal protein in human tissue. Methods: Eighteen biopsies of human liver were obtained with their consents from patients undergoing surgery. Liver samples were finely chopped and homogenized in the buffer. Liver homogenate was centrifuged in different steps to yield a microsomal pellet. Then content of total protein was determined according to Lowry method. Data were analyzed according to descriptive statistics method. Results: The value of MPPGL (microsomal protein per gram of liver) ranged from14.1 to 27.2 mg per gram of liver (mean 20.24±3.77). Conclusion: The values of MPPGL in this project were reported for the first time in Iran. The mean value of MPPGL in this project is lower than others studies. These results in this area, will aid the physicians to improve the level of safety of prescription of the medicines. Many doctors are unaware of the possible risks for patients whom have exposed by being treated with drugs.