اثر ال-كارنيتين بر صلاحيت تكويني جنين ‌هاي حاصل از تخمك‌ هاي موش سوري انتخاب شده با رنگ آميزي brilliant cresyl blue بعد از پارتنوژنز

Effect of L- carnitine on Developmental Competence of Mouse Oocytes Selected by Brilliant Cresyl Blue Staining after Parthenogenesis

سابقه و هدف: جنين‌‌هاي آزمايشگاهي حاصل از تكنيك‌ هاي كمك باروري (ART) مانند پارتنوژنز صلاحيت تكويني پايين‌تري نسبت به جنين‌هاي توليد شده در محيط in vivo دارند. مطالعه حاضر به منظور بررسي اثر تيمار با ال-كارنيتين طي IVM بر بلوغ تخمك‌ هاي نابالغ انتخاب شده توسط رنگ آميزي (brilliant cresyl blue (BCB و شايستگي تكويني بعدي آن‌ ها بعد از پارتنوژنز طراحي شد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، تخمك‌هاي نارس از تخمدان موش‌هاي سوري نژاد NMRI جمع‌‌آوري و با رنگ BCB به‌ مدت 90 دقيقه رنگ‌آميزي شدند. سپس تخمك‌‌هاي نارس BCB+ (با سيتوپلاسم آبي رنگ) به محيط كشت بافت 199TCM حاوي غلظت‌‌هاي مختلف ال-كارنيتين (0,0/3,0/6mg/ml) منتقل و در انكوباتور ˚C 37 و CO2 5 درصد قرار داده شدند. پس از 24 ساعت، ميزان بلوغ هسته‌اي (با استفاده از رنگ‌آميزي هوخست) و بلوغ سيتوپلاسمي (با استفاده از اندازه‌گيري ميزان گلوتاتيون از طريق رنگ آميزي مونوكلروبيامين) در تخمك‌هاي متافاز II بررسي گرديد. هم‌چنين ميزان كليواژ، ميزان تكوين بلاستوسيست (BDR) و تعداد كل سلول‌ هاي بلاستوسيست‌ بعد از پارتنوژنز محاسبه شد. يافته‌ها: تيمار با هر دو غلظت ال-كارنيتين باعث افزايش ميزان گلوتاتيون (p<0.01)، بلوغ تخمك‌ها (p<0/01) و (BDR(p<0/05 در مقايسه با گروه كنترل شد. با اين وجود تيمار با ال-كارنيتين بر ميزان كليواژ و تعداد كل سلول‌‌هاي بلاستوسيست تاثير آماري معني داري نداشت. استنتاج: يافته‌هاي مطالعه حاضر نشان داد كه تيمار تخمك‌‌هاي نابالغ +BCB موش سوري با ال-كارنيتين طي IVM، احتمالاً با بهبود بلوغ هسته‌اي و سيتوپلاسمي تخمك‌ ها باعث افزايش صلاحيت تكويني جنين‌‌هاي حاصل از پارتنوژنز مي‌شود.

Background and purpose: Embryos produced from in vitro assisted reproductive technologies (ART) manipulations, such as parthenogenesis, are less developmentally competent than in vivo-derived embryos. This study was designed to evaluate the effect of L-carnitine treatment during IVM on maturation of immature oocytes selected by Brilliant Cresyl Blue (BCB) staining, and their subsequent developmental competence after parthenogenesis. Materials and methods: Immature oocytes collected from NMRI mice ovaries were stained with BCB for 90 min. BCB+ oocytes (with blue color cytoplasm) were then cultured in tissue culture medium (TCM) 199 with 0.0, 0.3 and 0.6 mg/ml L-carnitine at 37 °C and 5% CO2 under maximum humidity. After 24 hours, nuclear maturation (using Hoechst staining) and cytoplasmic maturation (by measuring the intracellular glutathione (GSH) concentration with monochlorobimane) were recorded in metaphase II oocytes. Cleavage rate, blastocyst development rates (BDR) and total cell number of blastocyst were also determined after parthenogenesis. Results: Both L-carnitine concentrations significantly increased GSH (P<0.01), nuclear maturation (P<0.01) and BDR (P<0.05) compared with those in the control group. L-carnitine had no significant effect on cleavage rate and total blastocyst cell numbers. Conclusion: These results demonstrated that L-carnitine supplementation during IVM of immature BCB+ oocytes could increase developmental competence of oocytes after parthenogenesis, possibly by improvement of nuclear and cytoplasmic maturation of oocytes.