تأثير ژله رويال، ويتامين C و ويتامين E بر بيان ژن‌هاي كد كننده‌ي آنزيم‌هاي آنتي اكسيدان در بلوغ برون تني اووسايت بز

Effect of Royal Jelly, Vitamin C and Vitamin E on Genes Expression of Antioxidant Enzymes in in vitro Maturation of Goat Oocytes

هدف از اين پژوهش مقايسه بين توان آنتي ­اكسيداني ژله رويال، ويتامين E و ويتامين C به صورت افزودني، بر نرخ تكامل و بيان ژن‌هاي كدكننده‌ي آنزيم‌هاي آنتي ­اكسيدان در بلوغ برون تني اووسايت بز بود. براي تهيه اووسايت‌هاي بز، تخمدان‌ها بلافاصله بعد از كشتار، از لاشه دام جدا و درون فلاسك حاوي سرم فيزيولوژيك به آزمايشگاه منتقل شدند. كمپلكس اووسايت كومولوس از فوليكول‌هاي آنترال كوچك (6-2 ميلي متر) تخمدان جدا شدند و در محيط بلوغ اووسايت كه حاوي غلظت‌هاي مشخصي از ژله رويال، ويتامينE ، ويتامين C و ويتامين E+ ويتامين C بود، كشت داده شدند. پژوهش در قالب طرح كاملاً تصادفي، با شش تيمار آزمايشي شامل تيمارهاي شاهد، 10 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتر ژله رويال، 200 ميكرومول ويتامين E، 100 ميكرومول ويتامين C ،200 ميكرومول ويتامين E به همراه 100 ميكرومول ويتامين C و دي ام اس او (DMSO)1 در ده تكرار انجام شد. يافته‌هاي حاصل از اين پژوهش نشان داد كه افزودن ويتامين E و C و تركيب آنها نسبت به گروه شاهد به طور معني‌داري نرخ بلوغ برون تني را افزايش داد ولي افزودن ژله رويال به محيط كشت بلوغ اووسايت‌هاي بز، تفاوت معني‌داري را نسبت به تيمار شاهد در افزايش نرخ بلوغ نشان نداد. همچنين با اضافه كردن دو ويتامين به صورت تركيب، بيان نسبي ژن گلوتاتيون پراكسيداز به طور معني‌داري افزايش يافت و ژن‌هاي سوپر اكسيد دسموتاز و كاتالاز تحت تأثير تيمارهاي مختلف اختلاف معني‌داري نشان ندادند. مي‌توان نتيجه‌گيري كرد كه افزودن ويتامين‌هاي E به همراه ويتامين C نرخ بلوغ و توان آنتي اكسيداني اووسايت را نسبت تيمار ژله رويال بيشتر افزايش داد.

The purpose of this study was to compare the antioxidant ability of royal jelly, vitamin E and vitamin C as additives to the maturation media on in vitro maturation of goat oocyte. To prepare goat oocytes, ovaries collected from local slaughterhouse were transported to the laboratory into the flask containing warm saline (30-34oC( in less than an hour. Cumulus oocyte complexs were removed from small antral follicles (2-6 mm) with slicing method, and were transferred to IVM medium. Cumulus oocyte complexs were put in maturation medium for 24 hours, and were reached to metaphase meiosis II (nuclear maturation). This study was performed in a completely randomized design, with six treatments included control, 10 mg/mL royal jelly, 200 µM of vitamin E, 100 µM of vitamin C, 200 µM of vitamin E + 100 µM of vitamin C and DMSO (as a solvent of vit E) in ten replicates. The results of this study showed that addition of royal jelly, vitamin E and vitamin C to the maturation medium, increased in vitro maturation rate of goat oocyte in comparison of control group. Supplementation of vitamin E, vitamin C and their combination significantly increased the oocyte meiotic maturation rate (87.26% ± 4.45) compared with the royal jelly (76.26% ± 2.55) and the control group (71.1% ± 1.26). Also, the addition of vitamin E + vitamin C combination was significantly increased relative gene expression of glutathione peroxidase but the superoxide dismutase and catalase were not affected by the treatment groups. In conclusion, the combination of vitamin C and vitamin E improved maturation rate and redox status of oocyte during in vitro maturation.