مطالعه فيلوژنيتيكي و ژنوتيپي سويه هاي ويروس برونشيت عفوني گله هاي گوشتي به روش RT- PCR و تعيين توالي ژن گليكوپروتئينS1

Phylogenetic and genotypic study of Infectious bronchitis virus isolated from broiler herds by RT-PCR and S1 gene sequence analysis

تكامل و ايجاد سروتيپهاي جديد و مختلف ويروس برونشيت عفوني بطور مستمر در حال انجام است كه اين امر هر ساله ضررهاي اقتصادي فراواني به صنعت طيور وارد مي كند، لذا تعيين سريع و صحيح سروتيپ ها جهت انتخاب و توسعه ي واكسنهاي مناسب سويه هاي هر منطقه به عنوان يك اصل مهم و تعيين كننده در كنترل اين بيماري است. در اين مطالعه نمونه ها از ناي، ريه و كليه از گله هايي با علائم تنفسي، مشكوك به بيماري برونشيت عفوني از گله هاي پرورش مرغ گوشتي استان فارس و چهارمحال و بختياري به تعداد 40 نمونه بصورت تجميع از 40 گله جمع آوري شدند. نمونه پس از آماده سازي براي رديابي ويروس برونشيت عفوني با آزمايش RT-PCR انتخاب شد، سپس محصول PCR خالص شده براي تعيين توالي قطعه اي به طول 464 جفت باز از ژن S1 به شركت MWG آلمان ارسال شد. پاسخ توالي هاي اخذ شده بررسي و تصحيح شد. نتايج اين مطالعه نشان داد سويه ي variant 2 تبديل به سويه ي غالب در اين دو منطقه شده است. بيشترين شيوع جدايه ها مربوط به سويه ي variant 2 بود كه شامل 75% نمونه ها (9 نمونه) مي گرديد و پس از آن سويه ي ماساچوست قرار داشت كه در اين بين 6/16% نمونه ها (2 نمونه) و يك نمونه (8%) هم متعلق به سويه واكسن H120 بود. بنابراين با توجه به متفاوت بودن سويه هاي غالب در مناطق مورد مطالعه واكسنهاي موجود در بازار نمي تواند محافظت ايمني مناسبي ايجاد كند و نيازمند توسعه ي واكسنهاي جديد است.

Evolution and formation of IBV’s new serotypes Bare continuously in processing that every year cause a lot of economic loses in poultry industries, so rapid and accurate determination test is critical in order to choose and develop suitable vaccines for controlling of this disease in every region as an important and determinative principle. Despite vaccination against IBD, this disease is one of the economical important disease in the poultry industry that every year cause a lot of economic loses and despite vaccination also it happens. Specimens of trachea and lungs were taken from 40 suspected flock with respiratory problems collected from chicken farms in Fars and Chaharmahal and Bakhtiari Provinces. Samples were tested by Chicken Red Blood Cell Hem-agglutination and negative samples selected for determining Infectious bronchitis viruses by RT-PCR test. Then PCR product was purred by "High pure PCR product purification Kit" Germany (Roche) company has been sent to sequencing a piece with 464 nucleotide base pair. Sequences checked and corrected by MEGA 7 program. Phylogenetic analysis was made by MEGA 7 program using sequencing and National Center for Biotechnology Information. This study results show the majority of flocks infected by variant 2 (75% samples), then mass type (16.6% samples) and finally (8% samples) were H120 vaccine- like isolates. So in according to difference in dominant serotypes in this study with market place vaccines could not create cross immune therefore need to develop new vaccines.