تعيين هويت مولكولي انگل ليشمانيا با هدف قرار دادن ژن ITS-rDNAدر بيماران مشكوك به ليشمانيوز جلدي در استان سيستان وبلوچستان- ايران

ITS-rDNA and molecular typing of Leishmania spp. in suspected patients with cutaneous leishmaniasis in Sistan and Balochestan province, Iran

ليشمانيوزيك بيماري انگلي ناشي ازگونه هاي ليشمانيا مي باشد. تشخيص اوليه توسط علام باليني و مشاهده مستقيم انگل است. حساسيت روشهاي مولكولي نسبت به ديد مستقيم توسط ميكروسكوپ بيشتر است. تاكنون مطالعات جامع و كاملي در زمينه تعيين هويت گونه انگل در استان سيستان و بلوچستان صورت نگرفته است. در اين پژوهش گونه هاي ليشمانيا با استفاده از روشهاي مولكولي با هدف قرار دادن ژن ITS-rDNA در بيماران مراجعه كننده به مراكز درماني استان سيستان و بلوچستان صورت گرفت. اين مطالعه در سال 1393تا 1394 انجام گرفت. 82 نمونه لام مثبت جهت مطالعات مولكولي جمع آوري گرديد. بخشي از نمونه هاي برداشت شده به محيط كشت N. N. N تلقيح و براي تكثير سريع و ازدياد به محيط كشت RPMI-1640 همراه با 10 درصد سرم جنين گوساله انتقال داده شد. پس از استخراج DNA با استفاده از تكنيك RFLP- PCR تعيين گونه هاي ليشمانيا صورت گرفت. نرم افزارهاي SPSS و multalin جهت آناليز نتايج استفاده گرديد. تعداد 46 بيمار (٪56) آلوده به ليشمانيا ماژور و 36 بيمار (٪44) آلوده به ليشمانيا تروپيكا تشخيص داده شد. گونه غالب در شهرستان چابهار گونه ليشمانيا تروپيكا ودر شهرستان ميرجاوه ليشمانيا ماژور بود. در مركز استان هردو گونه ليشمانيا ماژور وتروپيكا مسؤل بيماري تشخيص داده شد. روش PCR-RFLP داراي حساسيت و اختصاصيت بالا بوده و براي تشخيص ليشمانيوزها و تعيين گونه سريع انگل هاي عامل بيماري مناسب مي باشد.

Leishmaniasis is a parasitic disease caused by Leishmania species. The early diagnosis focused on clinical symptoms and direct observation of the parasites. Molecular methods are more sensitive than the direct microscopy. The identity of the species in Sistan-Baluchistan province has not been taken yet. ITS-rDNA was used to detect the species of Leishmania in patients from Sistan-Baluchistan province using molecular methods. This study was conducted during 2014-2015. Positive smear samples (82) were collected for molecular studies. The parasites were inoculated in N.N.N culture (with RPMI-1640 medium and 10% fetal calf serum) for rapid proliferation. After DNA extraction, the PCR-RFLP was carried out to determine the Leishmania species. SPSS and Multalin software were used to analyse the results. Forty six (56%) and 36 patients (44%) were diagnosed Leishmania major and Tropica respectively. The dominant species in the city of Chabahar and Mirjaveh were Leishmania tropica and Leishmania major respectively. In the central region of the province, both leishmania major and tropica are responsible for the disease. The results of this study indicated that both forms of L. major and L. tropica were identified in Sistan and Balochestan Province in Iran, which could be due to unlawful entry from Pakistan and Afghanistan. PCR-RFLP has high sensitivity for the diagnosis of leishmaniasis and rapid species identification of the parasites.