وقوع بيماري آتشك گلابي در اثر Erwinia amylovora در استان گيلان

Study of Fire Blight on Pear Trees in Guilan Province Caused by Erwinia amylovora

بيماري آتشك گلابي با عامل Erwinia amylovora يكي از بيماري‌هاي خطرناك درختان ميوه دانه دار در بسياري از مناطق دنيا مي‌باشد كه موجب نكروز شدن بافت‌هاي ميزبان مي‌گردد. اين باكتري يك نكروژن تدريجي است كه مي‌تواند به تدريج با گسترش خود موجب تخريب تمام بافت‌هاي گياه ميزبان شود. در اين بررسي طي بازديد‌هاي مكرر از مناطق كشت گلابي آستانه اشرفيه، لاهيجان و كياشهر در استان گيلان از درختان آلوده به آتشك گلابي نمونه برداري به عمل آمد. علايم بيماري روي درختان گلابي آلوده به‌صورت نكروز سرشاخه‌ها همراه با ترشحات صمغ در بافت‌هاي آلوده بود. جهت جداسازي عوامل بيماري زاي باكتريايي تعدادي از بافت‌هاي آلوده، شاخه، تنه و جوانه‌‌ها پس از شستشو و ضدعفوني سطحي با هيپوكلريت سديم 5%. و شستشوي مجدد با آب مقطر سترون در آب پپتونه له شدند. سپس 100 ميكروليتر از عصاره روي محيط‌‌هاي كشت روي محيط آگار مغذي سوكروز دار حاوي آنتي بيوتيك سيكلوهگزاميد (50 ميكروگرم در ميلي ليتر ) با يك ميله شيشه‌اي خميده پخش گرديد بعد از سه تا پنج روز كلني‌‌هاي سفيد مايل به كرم كمرنگ انتخاب و روي محيط‌‌هاي كشت مذكور خالص شدند. جدايه‌‌هاي باكتري به‌دست آمده به‌صورت ميله‌اي شكل، گرم منفي و بي هوازي اختياري بودند. جدايه‌‌ها روي محيط كشت‌‌هاي غني از سوكروز توليد لوان نموده، ولي قادر به توليد رنگدانه فلورسنت در محيط KB نبودند. تمام جدايه‌‌هاي مورد بررسي در توتون و شمعداني فوق حساسيت ايجاد كردند. باكتري‌‌هاي جداشده اكسيداز، نيترات، اوره آز و ايندول منفي بوده و قادر به لهانيدن برش‌هاي سيب زميني، توليد گاز H2S و هم‌چنين رشد در دماي ºC 36 نبودند. به علاوه جدايه‌ها قادر به استفاده از سيترات، استوئين، سوربيتول و تري‌هالوز بوده و آزمون ژلاتين آنها نيز مثبت بود. بر اساس مجموع خصوصيات مرفولوژيكي، بيوشيميايي و فيزيولوژيكي و تكثير يك قطعه 937 جفت بازي از DNA با استفاده از روش واكنش زنجيره‌اي پلي مرآز (PCR) به كمك آغازگرهاي اختصاصي Ea1 و Ea2 جدايه‌هاي مذكور به عنوان Erwinia amylovora شناسايي شدند.

Fire blight caused by Erwinia amylovora, is a serious disease of pome fruits in many areas in the world which causes evaluative necrosis. Indeed, E. amylovora can invade the whole tree solely by internal progression through the host tissues. In this research, symptoms of necrotic shoots and exudates production on infected pear trees in different areas of Guilan province (Astaneh Ashrafieh, Lahijan and Kiashahr) were surveyed. Samples were taken from infected tissues of diseased trees. For isolation of bacterial causal agent, the infected tissues were crushed in pepton water, then 100µl of the extracts were cultured on Sucrose Nutrient Agar (SNA) and Luria Berthani (LB) containing Cyclohexamid antibiotic (50 µg / ml). The isolated bacteria were rod-shaped , gram negative and facultatively an-aerobic. The bacteria produced Levan on media including sucrose , but could not produce fluorescent pigments on King’s B medium. All strains made hypersensitive reaction on tobacco leaves. All isolates were oxidase , nitrate, urease and indole negative and were not able to rot potato tuber slices, produce H2S and grow in 36 °C. The isolates could use citrate, acetoin, sorbitol and trehalose and their gelatin test was positive. Based on morphological, biochemical, physiological characteristics and production of a 937 bp with specific primer Ea1 and Ea2 in PCR method, the strains were identified as E. amylovora. This is the first report of the existence of this bacterium on pear fruit trees in Guilan province.