بررسي خاصيت ضدميكروبي برخي سويه هاي ذاتي لاكتوباسيلوس پلانتاروم جدا شده از شير بز

Evaluation of antimicrobial properties of some in digenous lactobacillus plantarum strains isolated from goat,s milk

در اين مطالعه، فعاليت ضد ميكروبي، سويه هاي لاكتوباسيلوس پلانتارومجدا شده از شير بز مورد بررسي قرار گرفت. 67 نمونه شير بز از مناطق تهران و كرج جمع آوري شد و به منظور شناسايي و حضور با كتري هاي اسيد لاكتيك مورد ارزيابي قرار گرفتند. از ميان باكتري هاي اسيد لاكتيك جدا شده LAB ، 18 سويه از طريق الگوي تخمير قند و تعيين توالي 16S rRNA به عنوان لاكتوباسيلوس پلانتاروم شناسايي شدند. فعاليت ضد ميكروبي سويه هاي لاكتوباسيلوس پلانتاروم در مقابل تعدادي از عوامل بيماري زا، شامل:استافيلوكوكوس اورئوس، ليستريا منوسيتوژنز، سودوموناس آئروژينوزا، سالمونلا تيفي و اشرشيا كلي از طريق روش حفره اي آگار مورد بررسي قرار گرفت. نتايج نشان داد، 10 سويه لاكتوباسيلوس پلانتاروم، داراي فعاليت ضد ميكروبي در مقابل پاتوژن هاي مورد بررسي بوده، و از ميان آنها 6 سويه طيف گسترده تري از فعاليت ضد ميكروبي و مهار رشد در برابر تمامي پاتوژن هاي گرم مثبت و گرم منفي مورد آزمون را از خود نشان دادند. فعاليت ضد ميكروبي سوپرناتانت 6 سويه،بعد ازتيماربا عوامل فيزيكي و شيميايي نيز مورد بررسي هاي بيشتري قرار گرفت. فعاليت ضد ميكروبي سوپرناتانت ها پس از خنثي سازيpH،حفظ شد، از ميان آنها تنها سوپرناتانت 2 سويه LP14 وLP4 پس از تيمار با 1 ميلي گرم بر ميلي ليتر آنزيم كاتالاز فعاليت ضد ميكروبي شان حفظ شد. سوپرناتانت خنثي شده باكتري LP4 نسبت به آنزيم هاي ليزوزيم مقاوم بوده و آنزيم ليپاز فعاليت آن را كمي كاهش داد از سوي ديگر آنزيم هاي پروتئوليتيك مانند: پپسين، تريپسين و پروتئيناز k به طور كامل فعاليت ضدميكروبي را از بين بردند. سويه جدا شدهLp4 نسبت به خاصيت آنتاگونيستي خود و مهار رشد مقاوم بود. ماده شبه باكتريوسين توليد شده توسط LP4 به pH و حرارت مقاوم بود زيرا توانست گستره وسيعي از pH از3 تا 8 و دماي 121 درجه سلسيوس اتوكلاو را براي 15 دقيقه تحمل كند.اين ماده بعد از 4 هفته نگهداري در دماي 20- درجه سانتيگراد همچنان فعاليت ضدميكروبي خود را حفظ كرد و بعد از تيمار با غلظت 7 درصد NaCl، هنوز داراي فعاليت ضدميكروبي بود.

In this study the antimicrobial potential of Lactobacillus plantarum strains isolated from goat,s milk was evaluated. Sixty seven goat,s milk samples were collected from Tehran and Karaj and screened for the presence of lactic acid bacteria (LAB). Among the isolated LAB, 18 strains were identified as Lactobacillus plantarum by their carbohydrate fermentation pattern and 16S rRNA sequencing. Antimicrobial activity of the isolatedLactobacillus plantarum strains against a number of pathogens including Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, Listeria monocytogenes and Escherichia coli was evaluated by agar spot and well diffusion method. Results indicated 10 of theLactobasillusplantarum strains to possess inhibitory activity towards the tested pathogens, while 6 of these strains were shown to have wide spectrum of inhibitory activity and were able to inhibit the growth of the entire tested gram positive and gram negative pathogens. The antibacterial activity demonstrated by these 6 strains was further analyzed by subjecting their supernatant fluid to various physico-chemical treatments. The supernatant fluid of these strains retained their antagonistic action even after neutralization, while only 2 strains (LP4 and LP14) retained their antimicrobial activity after treatment with 1 mg/ml catalase. The supernatant fluids of the respected isolates LP4 was resistant to enzyme Lysozyme and lipase, while proteolytic enzymes like pepsin, trypsin and proteinase K completely destroyed its antibacterial potential. The isolates were resistant to their own antagonistic action. The bacteriocin like substance produced by LP4 was pH and heat resistant as it resisted wide pH range of 3-8 and autoclave temperatures of 121ºC for 15 min. This substance after 4 weeks storage at -20 0C still retained its antimicrobial activity and after treating by concentration of 7 percent NaCl, it was still active