جداسازي وشناسايي گونه‌هاي Alicyclobacillus از مراحل مختلف خط توليد رب گوجه فرنگي با استفاده از روش مبتني بر كشت ومولكولي و بررسي اثر بريكس بر رشد باكتري هاي Alicyclobacillus

Isolation and identification of Alicyclobacillus spp. from different steps in the production line of tomato paste using culturedependent and molecular methods and Evaluation of brix effect on Alicyclobacillus growth

هدف تحقيق، جداسازي و شناسايي آليسيكلوباسيلوس از مراحل توليد رب گوجه­ فرنگي و بررسي كارايي پاستوريزاسيون در حذف اين باكتري­ها بود. ايزوله ها از هر مرحله شامل پوره، رب گوجه ­­فرنگي قبل از پاستوريزاسيون و پس از پاستوريزسيون نهايي، شش نمونه در سه روز برداشته شد و پس از شوك حرارتي، با روش­هاي مبتني بركشت جداسازي شدند. جهت ارزيابي توانايي رشد باكتري و اثر بريكس بر رشد آن، نمونه هايي با بريكس 8 و 11 از رب گوجه فرنگي با بريكس 27-25، با رقيق سازي تهيه و همراه پوره بررسي گرديد. 17ايزوله پس از توالي­يابي و BLAST تا مرحله جنس وگونه شناسايي شدند.13سويه شناسايي شده مربوط به گونه Alicyclobacillus acidocaldarius بودند و 4 ايزوله شامل جنس هايBacillus ، جنس Brevibacillus (2 ايزوله) و يك ايزوله باكتري ناشناخته بودند. تعداد سلول هاي آليسيكلوباسيلوس در واحد حجم، بر مبناي كشت در رب قبل از پاستوريزاسيون cfu/ml± SD 29/0±34/2 و در رب پس از پاستوريزاسيون نهايي 17/0±31/2 بود كه بيانگر تاثير فرايند پاستوريزاسيون در كاهش تعداد سلول در واحد حجم بود. نتايج آزمون t جفت شده رب گوجه فرنگي نشان داد كه وابستگي ضعيفي (ضريب همبستگي491/0 و 409/0) بين تعداد سلول هاي آليسيكلوباسيلوس در واحد حجم با بريكس وجود دارد و همچنين بين تعداد سلول آليسيكلوباسيلوس درواحد حجم در بريكس 8 و 11 اختلاف معني داري وجود ندارد. اين بدان معني است كه افزايش 3 درجه بريكس تفاوت معني داري در تعداد سلول باكتري در واحد حجم، ايجاد نمي كند.

Objective of study was isolation and identification of Alicyclobacillus spp. from different steps in production of tomato paste and efficiency of pasteurization for elimination aforementioned bacteria. From each step of processing line including puree, tomato paste before first pasteurization and after final pasteurization, and six samples were obtained in 3 days. Following the heat-shock, Alicyclobacillus spp were isolated using culture-dependent methods. To evaluate growth ability of Alicyclobacillus and effect of Brix on its growth, samples were prepared with dilution corresponding to Brix 8 and 11 from tomato paste with Brix= 25-27 and evaluated along with puree samples. 17 isolates following sequencing and BLAST were identified up to genus and species level. 13 identified strains belonged to Alicyclobacillus acidocaldarius and four other isolates were Bacillus licheniformis strain TS_16, un known Bacterium, Brevibacillus thermoruber strain TS_05, and Brevibacillus thermoruber strain TS_06. Alicyclobacillus count was culturally calculated 2.34±0.29 and 2.31±0.17 cfu/ml±SD in tomato paste before and after pasteurization, respectively. This implies the effect of pasteurization in lowering the Alicyclobacillus count. Results of the paired t-test of tomato paste showed a weak correlation (correlation coefficient =0.491, 0.409) between microbial counts in tomato paste of Brix 8 with those of Brix 11 and also there was no significant difference of Alicyclobacillus count between Brix 8 and 11. This means that three-degree increase of Brix didn’t cause any significant variation in the microbial count.