رديابي و شناسايي گوجه‌فرنگي‌هاي تغيير يافته ژنتيكي با استفاده از تكنيك PCR و توالي‌يابي

Detection and identification of genetically-modified tomatoes using PCR technique and sequencing

گياهان تراريخته يكي از دستاوردهاي مهم بيوتكنولوژي نوين در زمينه كشاورزي هستند و در سال‌هاي اخير بر سطح زير كشت اين گياهان افزوده شده است. طبق قانون بين‌المللي ايمني زيستي، واردات گياهان تراريخته بدون مجوز كميته ايمني زيستي به داخل كشور ممنوع است. لذا، نياز به روش‌هاي دقيق براي ارزيابي تراريخته بودن يا نبودن آنها وجود دارد. در مطالعه حاضر، نمونه‌هايي از گوجه‌فرنگي از منابع مختلف مانند فروشگاه‌ها و گلخانه‌ها در سطح استان اصفهان جمع‌آوري شد تا به ظن تراريخته بودن، حضور ژن‌هاي ادغام شده خارجي در آنها ارزيابي شود. ابتدا، با آغازگرهاي عمومي P35S F/R و NOS-1/NOS-3 كه به‌ترتيب براي شناسايي پروموتور CaMV35S و خاتمه‌دهنده مورد استفاده قرار مي‌گيرند، قطعات نوكلئوتيدي به‌ترتيب 195pb و 180pb تكثير شدند. همولوژي 100% توالي نوكلئوتيدي اين قطعات در مقايسه با نمونه‌هاي موجود در بانك ژني تأييد نمود كه محصولات مورد بررسي به لحاظ ژنتيكي دست‌ورزي شده‌اند. به‌منظور شناسايي گوجه‌فرنگي‌هاي تراريخته، جفت آغازگر PG F/R، اختصاصي براي تكثير آنتي‌سنس ژن پلي‌گالاكتوروناز، به‌كار رفت. تمام نمونه‌هايي كه باند مربوط به پروموتور P35S يا خاتمه‌دهنده NOS يا هر دو را داشتند، باند 384pb مربوط به قسمتي از آنتي‌سنس ژن PG را تكثير كردند كه پس از توالي‌يابي و هم‌رديف‌سازي، شباهت 100% اين قطعه با بخشي از توالي ثبت شده ژن مزبور در بانك ژن محرز شد. نتايج اين تحقيق نشان داد كه گوجه‌فرنگي تراريخته در بازار ايران وجود دارد، بدون آنكه مصرف‌كنندگان از ماهيت تغيير يافته آن اطلاع داشته باشند.

Genetically modified (GM) plants are one of the great achievements of modern biotechnology in agriculture, which their cultivation has been increased in recent years. According to the international biosafety law, the import of genetically modified plants without the permission of Biosafety Committee into the country is prohibited. Therefore, we need an accurate method for assessing whether they are transgenic or not. In this study, samples of tomatoes were collected from various sources such as shops and greenhouses in Isfahan province to evaluate if they are transgenic. The initial screening of all samples was performed using primer pairs P35S F/R for CaMV35S promoter and NOS-1/NOS-3 for NOS terminator, amplified 195 bp and 180 bp of 35S promoter and NOS terminator sequences, respectively. The sequence of fragments was verified by comparison with known sequences in GeneBank and indicated a 100% homology, showing the studied samples are genetically engineered. The tomato samples were also tested for the presence of antisense polygalactoronase (PG) gene using the primer pair PG F/R, which amplified 384bp in all samples. Sequence analysis of this fragment resembled 100% similarity with the sequence of PG antisense gene in Gene Bank database. Results of this study showed that there is a transgenic tomato in the Iranian market. But, the consumers are not aware of its changed nature.