بررسي اثر ادجواني نانوكيتوزان بر ايمني زايي واكسن كشته‌ي آئروموناس هيدروفيلا در ماهي كپور معمولي(Cyprinus carpio)

Adjuvant effects of nanochitosan on immunogenicity of Aeromonas hydrophila vaccine in Cyprinus carpio

زمينه مطالعه: اخيرا گزارشات متعددي از اثرات تحريك ايمني و ادجواني نانوكيتوزان در حيوانات مختلف گزارش شده است. هدف: در اين مطالعه، اثر ادجواني نانوكيتوزان توليد شده از كيتوزان حاصل از كيتوزان پوسته ميگو بر ايمني زايي واكسن كشته آئروموناس هيدروفيلا در ماهي كپور معمولي (Cyprinus carpio) مورد بررسي قرار گرفت. روش كار: تعداد 300 عدد ماهي كپور معمولي (با وزن متوسط 6/5±51 گرم) به چهار گروه (هر گروه 75 ماهي و 25 ماهي در هر تكرار) تقسيم شدند. گروه 1، 2 و 3 با واكسن آئروموناس هيدروفيلا ايمن شدند. در گروه 1 واكسن بدون ادجوان، گروه 2، واكسن همراه ادجوان فروند و گروه 3 واكسن همراه ادجوان نانوكيتوزان استفاده شد. گروه 4 (شاهد) با سرم فيزيولوژي تزريق گرديد. ماهي‌هاي هر گروه در روز صفر و 14 ايمن شدند و به مدت 6 هفته با شرايط مشابه نگهداري و تغذيه شدند. خونگيري در انتهاي هفته 2، هفته 4 و هفته 6 تحقيق انجام گرفت. برخي شاخص‌هاي ايمني مانند تعداد گلبول‌هاي سفيد خوني، فعاليت لايزوزيم و قدرت ضدباكتريايي سرم، فعاليت كمپلمان، ميزان احياي NBT ، پروتئين و گلوبولين تام و عيار آنتي‌بادي ضد آئروموناس هيدروفيلا بررسي شد. در انتهاي دوره ماهي‌ها با غلظت LD50 باكتري زنده آئروموناس هيدروفيلا چالش داده شدند و ميزان تلفات طي 10 روز ثبت شد. نتايج نشان داد كه تعداد گلبول‌هاي سفيد خوني، فعاليت لايزوزيم سرم، ميزان گلوبولين، ميزان فعاليت NBT و عيار پادتن در دو تيمار فروند و نانوكيتوزان در مراحل نمونه گيري افزايش معني داري نسبت به تيمار كنترل يافت(P<0.05). در ميزان فعاليت ضدباكتريايي و سطح آلبومين سرم در تيمارهاي مختلف تفاوت معني داري مشاهده نگرديد(P>0.05). تلفات بعد از چالش نيز در هر دو تيمار نانوكيتوزان و فروند كاهش معني داري نسبت به تيمار بدون ادجوان و كنترل نشان دادند(P<0.05). نتيجه‌گيري نهايي: بر اساس نتايج اين تحقيق نانوكيتوزان داراي خواص ادجواني مناسب و قابل رقابت با ادجوان فروند بوده و گزينه خوبي براي جايگزيني ادجوان هاي رايج ماهي مي باشد.

BACKGROUND: Recently chitosan nanoparticles have been applied as an immunostimulant and adjuvant in biomedical fields. OBJECTIVES: In this study the adjuvant effects of nanochitosan, derived from shrimp shell's chithin, on immunogenicity of Aeromonas hydrophila vaccine in common carp were evaluated. METHODS: Totally 300 juvenile common carp (51±5.6 g, Mean ±SD) were randomly divided into four groups each contained three subgroups with 25 fishes. Groups 1, 2 and 3 were immunized intraperitoneally with A. hydrophila vaccine. No adjuvant used in group 1, but nanochitosan and freund adjuvant were used with vaccine in groups 2 and 3 respectively. Group 4 (Control) injected with normal saline instead of vaccine. Fish were immunised at days zero and 14 and fishes were reared in the same situation for 6 weeks. Serum samples were taken every other weeks and immunological parameters including WBC, serum lysozyme and bactericidal activity, serum complement activity, NBT reduction activity, total protein and globulin levels and anti A.hydrophila antibody titer were compared among the groups. At the end of experiment all groups were challenged with LD50 concentration of A. hydrophila and mortality recorded for ten days. RESULTS: WBC, serum lysozyme and complement activity, NBT activity, globulin level and anti A.hydrophila antibody titer were increased in nanochitosan and freund groups compare to control group (P<0.05). Serum bactericidal activity and serum albumin level showed no significant change among the groups (P>0.05). Challenge mortality decreased in immunised groups compare to control. CONCLUSIONS: Nonochitosan posses proper adjuvant effects which is comparable with freund adjuvant and can be a good candidate as an alternative to current adjuvant in fish vaccines.