كلونينگ و بيان ژن NP ويروس آنفلوانزاي پرندگان تحت تيپ H9N2 در اشريشياكلي

Cloning and expression of the NP gene of H9N2 avian influenza virus in Escherchia coli

آنفلوانزاي پرندگان يك بيماري عفوني خطرناك و با اهميت جهاني است كه خسارات مالي قابل توجهي به صنعت طيور تحميل مي­كند. تشخيص سرمي بر اساس بررسي آنتي­بادي توليد شده بر ضد نوكلئوپروتئين (NP) كه در ميان همه ويروس ­هاي A آنفلوانزا حفاظت شده است، مي­تواند براي نشان دادن سطح ايمني ضد همه تحت تيپ­هاي ويروس A آنفلوانزا استفاده گردد. هدف از اين مطالعه توليد پروتئين نوتركيب NP بود. بدين منظور ناحيه كدكننده ژن نوكلئوپروتئين جدايه ­اي از ويروس آنفلوانزاي پرندگان A/chicken/Iran/AH-1/06(H9N2) با آزمايش RT-PCR تكثير وبه درون وكتور بياني- پروكاريوتي (pMal-C2x) كلون شده و به داخل باكتري اشريشيا كلي سويه BL21(DE3) ترانسفورمه گرديد. وكتور نوتركيب تخليص شده جهت بررسي بيان پروتئين نوتركيب MBP-NP مورد استفاده قرار گرفت. پروتئين هدف با وزن حدود 97 كيلو دالتون از طريق SDS-PAGE و متعاقب آن وسترن بلات مورد ارزيابي قرار گرفت. مشاهده بيان پروتئين با وزن ملكولي قابل انتظار در SDS-PAGE و واكنش مثبت اين پروتئين با سرم پرنده آلوده به آنفلوانزا در وسترن بلات نشان دهنده بيان موفق ژن NP در E. coli بود.

Abstract:Avian influenza (AI) is a serious infectious disease with world-wide significance causing considerable financial losses in poultry industry.Serodiagnosis based on detection of antibody to the nucleoprotein (NP) that is conserved among all influenza A virus, can be used to demonstrate immunity against all subtypes of influenza A virus. The aim of this study was to produce recombinant nucleoprotein (NP). For this purpose, the coding region of nucleoprotein (NP) gene of A/chicken/Iran/AH-1/06(H9N2) AI isolate was amplified by RTPCR and cloned into a prokaryotic expression vector (pMal-C2x) and transformed into E. coli BL21(DE3). The purified recombinant vector for the expression of recombinant MBP-NP was used.Target protein with a weight of about 97 kDa by SDS-PAGE and subsequent Western blotting was evaluated. Observationthe expressed protein with expected molecular weight in SDS-PAGE and positive reaction ofthis protein with bird ,serum infected avian influenza In western blot showed that the expression of NP gene in E.coli was successful