طراحي و توليد سازه نوتركيب پروتئين TAT و بخش عملكردي سم ديفتريا و ارزيابي عملكرد آن بر روي لاين سلولي

زمينه و هدف: سرطان، يكي از مهلك ترين بيماري هايي است كه در عصر حاضر وجود دارد و درمان هاي مرسوم به آن نيز داراي موفقيت كمي بوده است. توكسين درماني سرطان، از روش هاي درماني نويني است كه موردتوجه متخصصان ساخت دارو قرار گرفته است. توكسين باكتري ديفتري شامل: سه بخش عملكردي، انتقال دهنده و اتصال دهنده بوده كه بخش عملكردي آن باعث مهار سنتز پروتئين و مرگ سلول مي شود. اين مطالعه با هدف توليد بخش عملكردي توكسين ديفتري به همراه پپتيد نفوذكننده TAT و بررسي ميزان كشندگي آن بر روي لاين سلولي صورت گرفت. روش بررسي: در اين مطالعه، طراحي پرايمر براي قطعه ژني tatdiph انجام شد و سازه ژني حاوي توالي زنجيره عملكردي توكسين ديفتري و توالي پپتيد TAT، تكثير و در ناقل بياني پروكاريوت،a 28pET حاوي دنباله هيستيدين كلون گرديد. بعد از انتقال به ميزبان باكتريايي (E.coli DE 21 BL 3)، القاي بيان با IPTG صورت گرفت. سپس پروتئين حاصل تخليص شد و پروتئين نوتركيب با كمك آنتي بادي ضد هيستيدين متصل به HRP با استفاده از تكنيك وسترن بلات تأييد گرديد. در مرحله بعد، ميزان كشندگي پروتئين كايمريك توليدشده بر روي رده سلولي 7MCF با روش MTT مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: نتايج حاصل از MTT نشان داد پروتئين نوتركيب TATDiph مي تواند رده سلولي سرطاني 7MCF را از بين ببرد. نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد پروتئين نوتركيب با بخش عملكردي توكسين ديفتري و پپتيد TAT، مي تواند بر روي رده سلولي 7MCF اثر كشندگي داشته باشد.