همسانه سازي و بيان توالي كد كننده ABRaAدر باكتري اشرشياكلي

Cloning and expression of the sequence coding ABRaA in Escherichia coli

ابرين يك پروتئين گياهي سمي از خانواده پروتئين هاي بازدارنده ي ريبوزومي و با ماهيت گليكوپروتئيني است. اين پروتئين شامل دو زنجيره متفاوت A وB است، زنجيره A با وزن 30 كيلو دالتون و با فعاليت ان- گليكوزيدازي rRNA و زنجيره B با وزن حدود 35 كيلو دالتون و با خاصيت لكتيني كه نقش آن تسهيل جذب زنجيره A به داخل سلول ميزبان است. در اين مطالعه، جداسازي توالي DNA كدكننده زنجيره A ابرين از گياهAbrus precatorius با استفاده از تكنيكPCR انجام و در تي وكتور همسانه سازي شد. توالي حاصل به طول bp 753 به عنوان اولين توالي ژنومي زنجيره A ابرين با شماره دسترسي MF573784 در پايگاه GenBank NCBI ثبت شد. در ادامه ساختار مولكولي و ويژگي هاي بيوشيميايي آن مورد بررسي قرار گرفت. بررسي ساختارهاي دوم و سوم توالي پروتئيني ABRaA با وزن مولكولي 28/07 كيلو دالتون، نشان داد كه اين پروتئين از نظر ساختاري مشابه با توالي پروتئين هاي بازدارنده ي ريبوزومي نوع II گياهي مي-باشد. بيان پروتئين نوتركيب در سويه (DE3) BL21 انجام و صحت آن با استفاده از آزمون لكه گذاري وسترن بلات تائيد شد.

Abrin is a plant-derived glycoprotein toxin composed of two polypeptide chains, A chain and B chain. The A-chain (molecular weight 30 kDa) as a N-glycosidase is able to catalyzes the deadenylation of the 28S rRNA and thereby inactivate ribosomes. On the other hand, B-chain (molecular weight 35 kDa) is responsible for binding to the target cell and internalization of A-chain. In this study, an abrin A-chain (ABRaA) DNA was isolated from Abrus precatorius by PCR technique and then cloned into a T-vector. This isolated sequence with 753 bp in length was registered to NCBI GenBank with the accession number MF573784, as the first report of A chain abrin DNA. In continue molecular structures and biochemicalcharacteristics of ABRaA were analyzed. The secondary and three dimensional analysis of the polypeptide structure with 28.07 kDa indicated that ABRaA is similar to the RIP-II family of plant proteins. The bacterial expression of ABRaA carried out in BL21 (DE3) strain and subsequently confirmed by Western blot.