معرفي يك دستگاه كاربردي براي تخليص ژن از ژل آگارز: خالص سازي و همسانه سازي ژن HMGR از جنسينگ آمريكايي

Introduction of an applied device for DNA purification from Agarose gel: purification and cloning of HMGR gene from American ginseng plant

به منظور همسانه سازي ژن، ابتدا بايد ژن موردنظر از ساير آلودگي ها (پروتئين، باندهاي غيرتخصصي و پرايمردايمرها و…) جدا شود. خالص سازي ژن موردنظر از ساير آلودگي هاي با روش هاي شيميايي و فيزيكي مختلفي قابل انجام است. در اين پژوهش براي اولين بار، ژن هدف موجود در بافر TAE. 1X با استفاده از يك روش فيزيكي با كمك ميدان الكتريكي جداسازي شد. ژن PqHMGR (FJ755158. 1) با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي طراحي شده از توالي هاي cDNA گياه جنسينگ (Panax quinquefolius) توسط واكنش زنجيره اي پليمراز تكثير شد. الحاق ژن خالص سازي شده به پلاسميد حامل PTG-19 و همسانه سازي آن در باكتري E. coli سويه DH5α با موفقيت انجام شد. در نهايت ژن PqHMGR توسط دستگاه و روش معرفي شده به خوبي خالص سازي و همسانه سازي شد و پلاسميد نوتركيب، به منظور تائيد موفق بودن همسانه سازي توالي يابي شد.

In order to gene cloning, at first desired gene should separate from other contaminants (proteins, primer-dimer bands unskilled, etc.). Various physical and chemical methods were used for purification of target gene from other contaminates; Here we have applied a new physical methods for purification of gen from agarose gel under an electric field containing TAE.1X fluid. We isolated PqHMGR form Panax quinquefoliusby using specific primers based on cDNA sequences. Ligation of isolated gene tovector and its cloning was done through E.coli (DH5α). Finally, PqHMGR gene was purified by the foresaid device and after cloning in desired vector, extracted plasmid were sequenced for confirmation of gene purification and cloning. Our resultd showed accuracy of this device in gene purification.