توليد و به‌كارگيري مؤثر آنتي‌بادي اختصاصي زردۀ تخم‌مرغ (IgY) براي مهار باكتري استافيلوكوكوس‌اورئوس

Efficient production and application of egg yolk antibody powder against Staphylococcus aureus

اين بررسي به‌­منظور ارزيابي ويژگي‌هاي ايمني (ايمونو) شيميايي و نيز تأثير مهاركنندگي پودر پادتن (آنتي­بادي) اختصاصي و غيراختصاصي زردۀ ‌­تخم ­مرغ بر رشد باكتري استافيلوكوكوس­اورئوس، به‌عنوان يكي از مهم­ترين سروتيپ ­هاي استافيلوكوكوس بيماري­زاي انساني و دامي در شرايط برون‌تني انجام شد. اين آزمايش با بهره‌گيري از شانزده قطعه مرغ تخم­ گذار لگهورن سفيد سويۀ هاي-لاين 36W- كه در سن 40 هفتگي قرار داشتند صورت ‌گرفت. براي ايمن كردن پرندگان، پس از بررسي منحني ‌رشد ميكروب و كشت‌ آن‌ها تا پايان مرحلۀ رشد ‌تصاعدي، واكسن كشته‌شده با بهره‌گيري از امواج فراصوت تهيه و تزريق شد. پس از گرد­آوري تخم ­مرغ­ها در يك دورۀ زماني 8 هفته­، IgY با بهره ­گيري از روش پولسون جداسازي و يخ خشكاني1 شد و در ادامه ويژگي‌هاي ايمني‌شيميايي و ضد باكتريايي آن سنجش شد. نتايج بيانگر آن است كه پس از نخستين ايمن‌سازي، فعاليت اختصاصي پادتن عليه باكتري مورد آزمون در پلاسماي مرغ­هاي تخم ­گذار و تخم ­مرغ افزايش يافت و اين افزايش در دورۀ آزمايش در سطوح بالا حفظ شد (0/01 < P). غلظت IgY و نيز درصد خلوص آن در پودر پادتن اختصاصي 71 درصد بالاتر (0/05 < P) از پودر آنتي‌بادي غيراختصاصي بود. بهره‌گيري از سطوح 100 و 200 ميلي‌گرم پودر پادتن اختصاصي سبب كاهش معني‌دار جمعيت باكتريايي در ساعت‌هاي 4 و 6 نگهداري (انكوباسيون) شد. در اين ميان بالاترين اثر مهاري در انتهاي مرحلۀ (فاز) لگاريتمي متعلق به سطح 200 ميلي‌گرم پودر پادتن اختصاصي بود كه توانست سبب كاهش ‌logCFU/mL 1/2 در مقايسه با گروه شاهد (كنترل) شود (0/01 < P). لذا اين يافته ­ها بيانگر آن است كه باكتري استافيلوكوكوس اورئوس به‌همراه ادجوانت فروند (نوع كامل در تزريق اول و نوع ناقص در تزريق دوم)، خاصيت القايي بالايي داشته و بهره­ گيري از روش پولسون راهي مؤثر براي توليد درازمدت و با بازدۀ بالا، براي به دست آوردن IgY اختصاصي با درصد خلوص و توان ضدباكتريايي (آنتي‌باكتريال) مطلوب است.

The aim of present experiment was to investigate the immunochemical characteristics as well as in vitro inhibitory effects of specific and nonspecific egg yolk antibody powder on Staphylococcus aureus growth, as one of the main pathogenic serotypes of Staphylococcus in human and animals. A total of 16 White Leghorn hens (Hy-Line W36) of forty weeks in age were immunized by killed sonicated vaccine after plotting the growth curve and incubating the bacteria until the end of exponential growth phase. This vaccine was prepared eggs were collected daily for 8 weeks, IgY was then isolated and lyophilized by Polson method. The immunochemical properties and growth inhibitory effects of specific and nonspecific sIgY were tested against Staphylococcus aureus. The results showed that the plasma and egg specific activity of IgY against Staphylococcus aureus markedly increased after the first immunization and remained on the highest titer throughout the experimental period (P<0.01). Total IgY concentration and purity of specific IgY powder were 71% higher rather than the non-specific IgY powder (P<0.05). The administration of specific IgY powder at 100 and 200 mg significantly (P<0.05) reduced the bacterial counts during the incubation hours of 4 and 6. Compared to control group, using the highest level of specific IgY could significantly decrease 1.20 log CFU/mL (P<0.01). Therefore, the present findings indicated that Staphylococcus aureus accompanying with Freund’s adjuvant (complete form in the first immunization and incomplete form in booster immunization) have a notable potential to produce high antibody levels for a long time period. In addition, Polson method is an effective way to obtain remarkable purity for IgY with high antibacterial efficiency and long term production.