تعيين سطح بهينه زرده تخم‌مرغ در رقيق‌كننده انجماد اسپرم بز با ارزيابي‌هاي برون تني

Determination of the egg yolk optimum level in the goat sperm freezing extender by In vitro evaluations

به ­منظور مقايسه اثر سطوح مختلف زرده تخم‌مرغ بر انجمادپذيري اسپرم بز، آزمايشي با استفاده از چهار رأس بز در قالب يك طرح كاملاً تصادفي با شش تكرار انجام شد. نمونه‌ها دو بار در هفته از حيوانات جمع‌آوري و در رقيق‌كننده بر پايه زرده در دو سطح 15 و 20 درصد رقيق و سپس منجمد شدند. پس از يخ ­گشايي، فراسنجه­ هاي كيفي ازجمله ويژگي‌هاي حركتي اسپرم با كمك CASA، يكپارچگي غشا، درصد سلول‌هاي اسپرم با غشاي فعال، درصد سلول‌هاي اسپرم با شكل طبيعي، وضعيت آپپتوز، يكپارچگي آكروزوم و قطعه­ قطعه ‌شدن DNA مورد ارزيابي قرار گرفتند. داده‌ها با استفاده از رويه GLM نرم‌افزار SAS آناليز شدند. جنبايي كل و جنبايي پيش‌رونده، در رقيق‌كننده حاوي 20 درصد زرده (به‌ترتيب 1/69±69/00 و 1/29±52/57) در برابر 15 درصد زرده (به‌ترتيب 1/69±68/21 و 1/29±52/35) تفاوت معني‌دار نداشت. همچنين درصد اسپرم زنده، اسپرم با غشاي فعال و درصد سلول‌هاي اسپرم طبيعي در رقيق‌كننده حاوي 20 درصد زرده (به­ ترتيب 1/08±83/88، 2/43±72/80 و 1/85±84/31) و در رقيق‌كننده حاوي 15 درصد زرده (به­ ترتيب 1/08±86/65، 2/43±72/37 و 1/85±79/25) اختلاف معني­ داري نداشتند. درصد اسپرم با آكروزوم سالم و نرخ قطعه‌قطعه شدن DNA بين دو گروه آزمايشي تفاوت معني‌داري نداشت. اما در آزمون آپپتوزيس، سلول‌هاي اسپرم زنده بيشتري در گروه حاوي 20 درصد (0/17±46/18) نسبت به گروه حاوي 15درصد (0/17±45/52) زرده ديده شد (0/05>P). داده­ هاي حاضر نشان­ دهنده بهبود نسبي انجمادپذيري اسپرم بز در رقيق ­كننده حاوي 20 درصد زرده تخم­ مرغ است، اما براي اظهارنظر دقيق‌تر در خصوص سطح مناسب زرده در رقيق‌كننده، به مطالعات باروري درون تني نياز است.

This research aimed to evaluate two concentrations of egg yolk inclusion rate (15% and 20%) in the semen extender of goat semen cryopreserved during breeding season. Thirty ejaculates were collected from five trained Mahabadi goats and diluted in egg yolk based extenders. The semen samples were frozen, and after thawing evaluated for seminal characteristics i.e. sperm motility and morphology, membrane and acrosome integrity, viability, apoptosis status and DNA fragmentation. The data were analyzed using GLM procedure in SAS software. There were not significant differences in total and progressive motility of sperm in 20% egg yolk extender (69.00±1.69 and 52.57±1.29 respectively) and 15% egg yolk extender (68.21±1.69 and 52.35±1.29 respectively). Moreover, sperm viability, membrane integrity, and normal sperm cells percentage in extender with 20% and 15% egg yolk were evaluated to be (83.88±1.08, 72.80±2.43, and 84.31±1.85) and (86.65±1.08, 72.37±2.43, and 79.25±1.85) respectively. Also, in the terms of sperm with intact acrosome and DNA fragmentation rate, no significant differences were observed in the extenders. In the apoptosis test, more live sperms were observed in the group containing 20% egg yolk compared with the one containing 15% egg yolk. To elucidate the effect of diluents used in present study on sperm fertility, further studies should be conducted in vivo.