بررسي پايداري بيان برخي ژن هاي مرجع به روش Real-Time PCR تحت تنش زيستي در گياه برنج

هدف: در پژوهش هاي بيان ژن با استفاده از Real-time PCR كه ابزار قدرتمندي براي تجزيه و تحليل سازوكارهاي مقاومت به تنش هاي زيستي در گياهان است، انتخاب و اعتبارسنجي ژن هاي مرجع به منظور بهينه كردن بيان ژن ها بسيار مهم مي باشد. اين تحقيق با هدف بررسي كارايي و انتخاب ژن هاي مرجع مناسب براي بهينه سازي اطلاعات حاصل از PCR زمان واقعي در گياه برنج تحت تنش زيستي انجام شد. مواد و روشها: بدين منظور، هشت ژن كنترل داخلي شاملUBQ5 ،eIF4A ، Actin11، Actin1، UBC، Cylophilin، 18SrRNA و GAPDH بررسي شد. تنش زيستي در بافت برگي گياهچه هاي 28 روزه رقم فجر و در حضور عامل بيماري قارچي Rhizoctonia solani RBL1، سيليكات پتاسيم به عنوان القاء كننده مقاومت، جدايه-هايPseudomonas با خاصيت آنتاگونيستي و القاء كنندگي و در سه دوره زماني (6، 24 و 72 ساعت) اعمال شد. نتايج: بررسي پايداري بيان ژن هاي مرجع با استفاده از نرم افزار BestKeeper نشان داد؛ كه ژن UBC از پايداري بيان بيشتري نسبت به ساير ژن هاي مورد بررسي در شرايط تنش زيستي در نمونه بافت برگي گياه برنج برخوردار بوده و بر اساس آماره توصيفي ژن هاي UBC و Actin11 داراي بيشترين همبستگي (0.97) با شاخص BestKeeper بودند. همچنين، ژن هاي UBC و Actin11 داراي بيشترين پايداري (كمترين ضريب تغييرات) بودند. بر اساس تجزيه و تحليل داده ها با استفاده از نرم-افزار NormFinder نيز ژن هاي Actin11 و eIF4a (به ترتيب 0.356 و 0.567) بيشترين ميزان پايداري را نشان دادند. نتيجهگيري كلي: بررسي بيان ژن‌هاي مرجع با استفاده از ميانگين هندسي ژن هاي UBC و Actin11 در مقايسه با ژن Actin1 نشان دهنده ضرورت انتخاب مناسب ژن مرجع مي باشد. نتايج اين تحقيق نشان مي دهد كه ژن هاي UBC و Actin11 ژن هاي مرجع مناسبي براي بهينه سازي داده هاي بيان ژن به وسيله تجزيه و تحليل Real-Time PCR در گياه برنج مي باشند.