بررسي امكان انتقال cDNA ژن منگنز‌پراكسيداز (mnp) از قارچ صدفي به قارچ دكمه‌اي سفيد با كمك آگروباكتريوم

قارچ دكمه‌اي سفيد يكي از مهم‌ترين محصولات باغباني در دنيا به شمار مي‌رود كه در برداشت سوم محصول قابل قبولي توليد نمي‌كند. دليل اين امر كاهش مواد غذايي و ناتواني اين قارچ در استفاده بهينه از كمپوست ذكر شده است. تغيير بيان يا نوع آنزيم‌هاي موثر در تجزيه تركيبات ليگنيني نظير منگنزپراكسيداز راه‌حل‌هاي احتمالي حل اين مشكل مي‌باشند، كه به نظر مي رسد بتوان با بهره گيري از روش انتقال ژن از طريق آگروباكتريوم به اين هدف دست يافت. در اين پژوهش از قارچ خوراكي صدفي واريته فلوريدا به‌عنوان منبع ژن منگنزپراكسيداز و بافت‌هاي تيغه و كلاهك قارچ دكمه‌اي سفيد نژاد 737 به عنوان گيرنده ژن استفاده شدند. باكتري آگروباكتريوم سويه‌ي LBA4404 داراي پلاسميد p13H88FM نيز به‌عنوان ناقل به كار رفت. محيط كشت گزينشگر حاوي 30 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر آنتي‌بيوتيك هيگرومايسين براي انتخاب ريزنمونه‌هاي تراريخت مورد استفاده قرار گرفت. ريزنمونه‌هاي تيغه كه نرخ تراريزش آن ها پنج درصد بود، بهتر از ريزنمونه‌هاي كلاهك كه نرخ تراريزش آن ها صفر درصد بود، به روش تراريزش مورد استفاده پاسخ دادند. علاوه بر توانايي رشد بر روي محيط كشت انتخابي، واكنش زنجيره‌اي پليمراز با آغازگرهاي اختصاصي ژن‌هاي hph و mnp به‌عنوان يكي از روش‌هاي تأييد تراريختگي، سبب تكثير قطعات به ترتيب 1049 و 1086 نوكلئوتيدي شد و تراريختگي كلني‌هاي قارچي را تأييد كرد.