بررسي تغييرات بافتي قرنيه خرگوش بعد از عمل كلاژن كراس لينكينگ با اشعه ماورا بنفش و ريبوفلاوين A

Histopathological Finding of Cornea after Collagen Cross-Linking Using Riboflavin and Ultraviolet A in Rabbit

هدف: ارزيابي تغييرات بافت‌شناسي قرنيه در خرگوش بعد از انجام عمل كلاژن كراس لينكينگ تسريع يافته. روش پژوهش: چشم هاي راست 7 سر خرگوش آلبينوي نيوزيلندي با وزن 1/5 تا 2 كيلوگرم مورد مطالعه قرار گرفت. چشم‌هاي سمت راست به عنوان گروه مورد و چشم‌هاي چپ در گروه شاهد در نظر گرفته شدند. اپي‌تليوم چشم‌هاي راست خارج شده و محلول ريبوفلاوين 0/1 (10 ميلي گرم ريبوفلاوين 5- فسفات در 10 ميلي ليتر دكستران-T- 500، 20 درصد) به مدت 30 دقيقه هر 3 دقيقه يك بار چكانده شد و در معرض اشعه UVA به مدت 10 دقيقه قرار گرفت و عمل كراس‌لينكينگ انجام شد. همه خرگوش‌ها به طور انساني يوتانايز شده و از لحاظ بافت‌شناسي مورد ارزيابي قرار گرفتند. آپوپتوز با استفاده از روش تانل بررسي شد. يافته‌ها: در ميانگين درصد سلول‌هاي آپوپتوتيك در گروه‌هاي درمان و شاهد تفاوت معني‌داري وجود داشت. در هر دو سلول‌هاي اندوتليال و كراتوسيت‌ها در قرنيه درمان يافته ميزان سلول‌هاي آپوپتوتيك به صورت معني‌داري بيش‌تر از گروه شاهد بود. در بررسي كلي قرنيه (كراتوسيت‌ها و اندوتليوم) در چشم راست خرگوش‌ها، ميانگين و انحراف معيار درصد سلول‌هاي آپوپتوتيك 3/2±18/29 و در چشم چپ برابر يا 1/7±6/29 بود. در بررسي آپوپتوز سلول‌هاي كراتوسيت به صورت جداگانه در چشم راست ميانگين و انحراف معيار درصد كراتوسيت‌هاي آپوپتوتيك 15/29±2/56 بود كه در مقايسه با چشم چپ 5/71±1/5 به طور معني‌داري بيش‌تر بود (P<0/001). ميانگين و انحراف معيار سلول‌هاي آپوپتوتيك اندوتليال در چشم راست و چپ به ترتيب 2/86±1/07 و 0/43±0/53 بود كه از لحاظ آماري معني‌دار بود (0/026=P). نتيجه‌گيري: با وجود اين كه CXL روش مطمئني براي جلوگيري از پيشرفت بيماري كراتوكونوس مي‌باشد، ولي به علت آسيب سلول‌هاي اندوتليال (در مطالعه حاضر و گزارشات ديگر) هنوز خطر آسيب سلول‌هاي اندوتليال و عوارض مربوط به آن وجود دارد و مطالعات بيش‌تر مورد نياز مي‌باشد.

Purpose: To evaluate the histopathological changes of the cornea in rabbit corneas after accelerated collagen cross-linking. Methods: Right eyes of 7 adult New Zealand albino rabbits weighing 1.5 to 2.0 kg were studied. Right eyes of all animals were in the treatment group and left eyes were in the control group. The epithelium of all right eyes was removed and was crossed-linked with riboflavin 0.1% solution (10 mg riboflavin-5-phosphate in 10ml 20% dextran-T-500) applied every 3 minutes for 30 minutes, and exposed to UVA (360 nm, 3 mW/cm2) for 10 minutes. All rabbits were humanely euthanized and examined histologically. Apoptosis was evaluated using TUNEL staining. Results: There was a significant difference in the mean percent of apoptotic cells in the treated and control groups. In both keratocyte and endothelial cells of the treated cornea, the number of apoptotic cells was significantly higher than the control group. In the evaluation of cornea totally (endothelial and keratocyte), the mean percent and standard deviation of apoptotic cells were 18.29 ± 3.2 in right eyes and 6.29 ± 1.7 in left eyes. In the evaluation of apoptosis in keratocytes separately, the mean percent and SD in right eyes were 15.29±2.56 that was significantly higher in comparison with the left eyes 5.71±1.5. The mean and SD of apoptotic endothelial cells in right and left eyes were 2.86±1.07, 0.53±0.43, respectively, that were statically significant (P= 0.026). Conclusion: Although CXL is a safe procedure to arrest progression in keratoconus disease, due to endothelial cell damage in our study and others, there are some risks for endothelial cell damage and related complications; so, it needs for more studies.