ايجاد سويه مخمر حساس به تاكسول با القاي جهش TUB2 Asp26

سابقه و هدف: پاكلي‌تاكسل، يك تركيب ضد ميكروتوبولي موثر بر سرطان‌هاي ريه، تخمدان و سينه است. توليد كم اين دارو در درخت سرخدار و نيز مقاومت به آن در مراحل شيمي درماني، ازعوامل محدوديت كاربردي پاكلي ‌تاكسل هستند. هدف اين پژوهش، ايجاد سيستم غربالگري براي پيدا كردن منابع جديد توليد تاكسول، با استفاده از سويه جهش‌يافته ساكاروميسس سرويزيه حساس به تاكسول ‌مي‌باشد. مواد و روش‌ها: براي ايجاد جهش در ژن TUB2 كروموزوم مخمر، آغازگرهاي حاوي تغيير در كدون 26 از گليسين به آسپارتيك اسيد؛ (  GGT بهGAT) طراحي و با كمك واكنش زنجيره اي پلي مراز در سه مرحله تكثير ژن TUB2 Asp26  انجام گرفت. سپس ژن TUB2 از سويه مخمر هاپلوييد در وكتور بياني مخمري در پروموتر گالاكتوز همسانه‌سازي گرديد. پس از تراريخت‌سازي مخمر هاپلوييد با سازه GalTUB2، pZF58))، براي بار دوم با محصول PCR از ژن TUB2 Asp26  و در محيط حاوي قند گالاكتوز تراريخت ‌سازي و عليه µM 40 تاكسول، غربالگري تراريخته‌ها انجام گرفت. يافته‌ها: در سويه مخمر YNHA1، حاصل از غربالگري 84 تراريخته، مقدار MBC  عليه تاكسولµM 50 تعيين گرديد. مخمري با نقص در ترابرهاي غشايي و TUB2 كه در محل اتصال تاكسول در4 امينواسيد مشابه بتاتوبولين مغز و تنها در آمينواسيد 26 مشابه مخمر بود، توانست µM 25 تاكسول را تحمل كند. اما در پژوهش حاضر به دليل استفاده از ميزبان مخمر كه نقص در ترابرهاي غشايي نداشت، ميزان تحمل تا 2 برابر افزايش يافت. نتيجه گيري: اين مخمر جهش‌يافته‌، مي‌تواند براي پيدا كردن منابع جديد توليد كننده‌هاي تاكسول با توان توليد تا µM 50، در غربالگري‌ها به كار رود.