كليدواژه :
كاسپاز-3 , تكثير سلولي , سرطان كولوركتال , ايكوزاپنتاينوييك اسيد
چكيده فارسي :
زمينه و هدف: استفاده از تركيبات طبيعي با سميت اندك بر سلول‌هاي طبيعي، جهت درمان سرطان كولوركتال اهميت زيادي دارد. در مطالعه حاضر، اثر ايكوزاپنتاينوييك اسيد (Eicosapentaenoic acid, EPA) روغن ماهي بر تعداد سلول‌ها، تكثير سلولي و فعاليت كاسپاز-3 در رده سلولي سرطان كولوركتال انساني LS174T بررسي گرديد.
روش بررسي: اين مطالعه تجربي در آزمايشگاه كشت سلول، پژوهشكده زيست فناوري دانشگاه اروميه از فروردين تا شهريور سال 1396 انجام گرديد. پانصد هزار سلول LS174T در محيط كشت كامل در C° 37 و 5% Co2 به مدت 24 ساعت كشت داده شدند. سپس سلول‌ها با غلظت‌هاي 50 تا μmol 200 ايكوزاپنتاينوئيك اسيد به مدت 48 ساعت تيمار شدند و تعداد سلول‌ها با استفاده از لام نئوبار شمارش گرديد و فعاليت كاسپاز-3 با روش كالريمتري اندازه‌گيري شد. همچنين پنج هزار سلول با غلظت‌هاي ياد شده از ايكوزاپنتاينوييك اسيد تيمار شده و در زمان‌هاي 24 تا 72 ساعت، تكثير سلولي با استفاده از آزمون WST-1 بررسي گرديد.
يافته‌ها: تيمار سلول‌ها با غلظت‌هاي 50 تا μmol 200 ايكوزاپنتاينوييك اسيد، تعداد سلول‌ها را به‌طور وابسته به دوز كاهش و تكثير سلولي را به‌صورت وابسته به دوز و زمان كاهش داد. پس از 72 ساعت تيمار سلول‌ها با μmol 200 ايكوزاپنتاينوييك اسيد، ميزان تكثير سلولي 30/3% در مقايسه با سلول‌هاي تيمار نشده محاسبه شد. پس از 48 ساعت تيمار، فعاليت كاسپاز-3 با غلظت‌هاي افزاينده ايكوزاپنتاينوييك اسيد، افزايش يافت. به‌طوري‌كه در غلظت μmol 200 ايكوزاپنتاينوييك اسيد، فعاليت كاسپاز-3، 3/4 برابر سلول‌هاي تيمار نشده محاسبه شد.
نتيجه‌گيري: ايكوزاپنتاينوييك اسيد تعداد سلول‌هاي بدخيم كولوركتال و تكثير آن‌ها را كاهش مي‌دهد و فعاليت كاسپاز-3 را كه يك پروتيين اجرايي در القاي آپوپتوز است فعال مي‌كند.
چكيده لاتين :
Background: Using natural compounds with low toxicity on normal cells and high
efficacy on malignant cells is highly appreciated for treatment of colorectal cancer
(CRC). In the present study, the effect of fish-oil derived eicosapentaenoic acid (EPA)
on the cell number, cell proliferation rate and caspase-3 enzyme activity in LS174T
human colorectal cancer cell line was investigated.
Methods: This experimental study was performed in cell culture lab, Institute of
Biotechnology, affiliated to the Urmia University, Urmia, Iran from April to September
2017. LS174T colorectal cancer cells at a density of 5×105 cells per well were cultured
in RPMI-1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and kept at
37 °C in a humidified incubator with 5% CO2 for 24 hours. Thereafter, the cells were
treated with 50, 100, 150 and 200 μmol EPA for 48 hours and cell numbers were
counted using neobauer chamber and caspase-3 activities were measured by performing
the caspase-3 colorimetric assay (Abcam, Cambridge, MA, USA). Furthermore, 5×103
LS174T colorectal cancer cells were cultured and treated with the above-mentioned
EPA concentrations for 24, 48 and 72 hours, after which cell proliferation rate was
evaluated by WST-1 proliferation assay (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany).
Results: Treatment of LS174T colorectal cancer cells with 50, 100, 150 and 200 μmol
EPA decreased the number of cells in a dose-dependent manner. We also found that
treatment of malignant cells with increasing EPA concentrations (50 to 200 μmol)
significantly decreased cell proliferation in a dose and time dependent manner. After a
72 hours treatment of LS174T cells with 200 μmol EPA, cell proliferation was
calculated to be 30.3% compared to untreated control cells. Following 48 hours
treatment, caspase-3 activity increased with increasing EPA concentrations in which at
200 μmol EPA, caspase-3 activity increased by 3.4 fold compared to untreated control
cells.
Conclusion: Fish-oil derived eicosapentaenoic acid as a safe compound decreases the
number of colorectal cancer cells and their proliferation rate and activates caspase-3
enzyme, as an executor protein in apoptosis.
