مطالعه وطراحي روش تشخيص سريع ويبريوكلرا با ايجادكمپلكس كوآگلوتيناسيون با استفاده از استافيلوكوكوس اورئوس واجد پروتئين A

Rapid Detection of Vibrio Cholera by a Coagglutination Complex using Staphylococcus aureus Including Protein A

مقدمه: ويبريوكلرا باكتري بيماريزا گرم منفي است كه عامل وبا بيماري اسهال كشنده است. وبا عمدتاً در ماه ­هاي گرم، وقتي باكتري بتواند در آب آلوده به مدفوع به سرعت تكثير كند مشاهده مي ­گردد. اين بيماري يك نوع اسهال شديد است كه در طي قرن ­ها به شدت وضعيت بهداشت و اقتصاد جوامع مبتلا را تحت تاثير قرار مي­ دهد. طراحي و ارائه يك روش سريع و قابل اعتماد براي شناسايي ويبريوكلرا به عنوان يك بيماري مسري و باكتري سريع شد و قابل انتقال يكي از چالش هاي اين دهه مي باشد. مواد و روش ها: خرگوش ­هاي سفيد نيوزيلندي با سلول كامل ويبريوكلرا اگاوا و اينابا ايمن شدند. گاماگلوبين ­هاي به ­دست آمده از سرم تام در مرحله اول توسط ترسيب سولفات ­آمونيوم تخليص و تغليظ گرديد و سپس خلوصاين پادگن ها با به كارگيري كروماتوگرافي ميلي تركيبي در مرحله بعد افزايش يافت. .اين آنتي­ بادي­ ها به سلول ­هاي كامل استافيلوكوكوس اورئوس cowan 1 NCTC-8325 متصل گرديد. نمونه ­هاي سواب ركتال به يك محيط آب پپتونه قليايي(pH 8.6) غني شده تلقيح گرديد و به مدت 5 ساعت در دماي 37 درجه قرار گرفتند. يك قطره از هر نمونه را با يك قطره از كمپلكس كوآگلوتيناسيون ويبريوكلرا مخلوط و نتايج در عرض 3-2 دقيقه گزارش گرديد. يافته هاي پژوهش: نتايج حاصل از اندازه گيري حساسيت، ويژگي و دقت آزمون طراحي شده در مقايسه با روش كشت استاندارد به ترتيب برابر 97، 99 و 98 درصد حاصل گرديد كه به عنوان يك روش سريع و قابل اعتماد جهت به كارگيري در شيوع اندميك يا همه گير بيماري كشنده و قابل انتقال وبا روش كارآمدي به حساب مي آيد. بحث و نتيجه گيري: روش كوآگلوتيناسيون طراحي شده در اين پژوهش يك روش ساده، سريع و قابل اعتماد براي تشخيص ويبريوكلرا در نمونه مدفوع مي باشد كه مي تواند در شناسايي سريع و كنترل موارد اسهال شديد حاصل از بيماري وبا به­ خصوص در زمان همه گيري در مناطق با امكانات آزمايشگاهي حداقل مورد استفاده قرار گيرد و مانع شيوع و مرگ و مير توسط اين بيماري مسري گردد.

Introduction: Vibrio cholera is a gram-negative bacterium that causes cholera which is an acute diarrheal illness. Cholera outbreak mostly happens in hot seasons when the bacteria reproduce rapidly in water contaminated with feces. Severe diarrhea and mortality have been the prevalent symptoms of cholera which affect the hygienic status and economic features of humans during centuries. There is a challenge currently to plan and propose a quick and reliable method to detect vibrio cholera which has been one of the fast growing and contagious disease in this decade. Materials & Methods: New Zealand white rabbits were immunized with vibrio cholera Ogawa and Inaba whole cells. The obtained gamma globulin from the whole serum was purified through ammonium sulfate precipitation method and then concentrated in this study. Subsequently, the purity of these antigens increased with the use of mixed mode-chromatography in the next step. The purified antibodies were connected to staphylococcus aureus cowan 1 NCTC-8325 whole cells. Rectal swab samples were inoculated into an enriched Alkaline Peptone Water medium (pH 8.6) incubated for 5 h at 37 °C. One drop from each sample was mixed with one drop of vibrio cholera co-agglutination complex. Subsequently, the results were read in 2-3 min. Findings: The obtained results showed 97%, 99%, and 98% of sensitivity, specificity, and accuracy from the proposed assay, respectively, compared to the standard culture methods. This proposed assay is considered as a rapid and reliable method to evaluate endemic or epidemic transmission of fatal illnesses. Discussion & Conclusions: The proposed co-agglutination test is a simple, rapid, and reliable method to detect Vibrio cholera in fecal specimens. This method can be utilized to detect and control severe diarrhea which results from vibrio leading to the prevention of mortality, especially in areas with minimal laboratory facilities.