بررسي اثر اوژنول بر بيان ژن ‌هاي CASP8 و CASP9 در سلول ‌هاي رده سرطان كولون HT-29

Study the Effect of Eugenol on CASP8 and CASP9 Gene's Expression in Colon Cancer Cell Lines HT-29

مقدمه: در سال­ هاي اخير بسياري از مطالعات علمي و پزشكي نشان مي ­دهند كه اوژنول با فعاليت ضد التهابي، آنتي­ اكسيداني، تاثيرگذاري بر چرخه­ سلولي و القاء آپوپتوز مي ­تواند در پيشگيري و كاهش سرعت پيشرفت سرطان مفيد واقع شود. در همين راستا پژوهش حاضر نيز اثر اوژنول بر قابليت زيست پذيري و ميزان بيان ژن­ هاي CASP8 و CASP9 در سلول­ هاي رده سرطان كولون انسان(HT-29) را مورد بررسي قرار داده است. مواد و روش ­ها: در پژوهش حاضر سلول­ هاي رده سرطان كولون انسان(HT-29) در محيط كشت RPMI-1640 غني شده با 10 درصد سرم جنين گاوي كشت داده شدند. با تيمار سلول ­ها در غلظت ­هاي 250، 500، 750، 900 و 1000 ميكرومولار اوژنول و انكوبه شدن در زمان ­هاي 24، 48 و 72 ساعت، ميزان قابليت زيست پذيري سلول ­ها با استفاده از آزمون MTT بررسي شد. بيان ژن­ هاي CASP8 و CASP9 نيز به وسيله­ تجزيه و تحليل Real-time PCR در سلول ­هاي تيمار شده در غلظت 750 ميكرومولار و در سه زمان مورد بررسي قرار گرفت. يافته­ هاي پژوهش: همگام با افزايش غلظت و مدت زمان تيمار، هر دو رده سلولي با كاهش درصد سلول­ هاي زنده مواجه شدند كه البته اين كاهش در سلول­ هـــاي سرطاني بسيار بيشتر از سلول­ هاي فيبروبلاستي مشاهده شد. هم چنين در رده تيمار شده با غلظت 750 ميكرومولار، بيــــان ژن­ هاي CASP8 و CASP9 به صورت معني ­داري نسبت به گروه­ هاي كنترل افزايش يافت. بحث و نتيجه گيري: اوژنول احتمالاً داراي اثر مهاري بر رشد، تكثير و تهاجم سلول ­­هاي رده سرطان كولون از طريق افزايش بيان ژن­ هاي CASP8 و CASP9 دارد و آپوپتوز را در سلول ­هاي دودمان سرطاني HT-29 القاء كرده و موجب كاهش خطر سرطاني شدن سلول ­هاي عادي شود.

Introduction: Many scientific and medical studies in the recent years have shown that Eugenol could be an effective reagent in preventing and reducing cancer progression by antioxidant and anti-inflammatory activities and induction of apoptosis in cancer cells. In this regard the present study also examined the effect of Eugeonl on the viability and expression of CASP8 and CASP9 genes in human colorectal cancer cell line (HT-29). Materials & Methods: In the present study, human colorectal cancer cell line (HT-29) was cultured in RPMI-1640 medium enriched with 10% bovine serum. The cells were treated in different concentration (250, 500, 750, 900, 1000 μM) of Eugenol and incubated for 24, 48 and 72 hours. After that cell viability was analyzed by MTT assay. The expression of CASP8 and CASP9 genes was also evaluated by Real-time PCR analysis in treated cells at 750 μM concentration of Eugeonl and during 24, 48 and 72 hours, incubation. Findings: Along with increasing concentration and duration of Eugenol treatment, both cell lines encountered a decrease in the percentage of live cells. Although this reduction was found to be much higher in the cancer cells than in fibroblastic cells. Also, in the treated group with a concentration of 750 μm, expression of CASP8 and CASP9 genes significantly increased compared to control groups. Discussion & Conclusions: Eugenol may have an inhibitory effect on the growth, proliferation and invasion of colon cancer cells by increasing the expression of CASP8 and CASP9 genes, and inducing apoptosis in HT-29 cancer cells and reducing the risk of cancerous cell proliferation it turns out.