عصاره رزماري، مكمل سرم و القاء كننده تكثير سلول هاي بنيادي چربي انساني در شرايط كشت آزمايشگاهي

Rosemary Leaf Extract, a Serum Supplement and Inducer of Human Adipose stem Cells Proliferation in Vitro

عصاره برگ رزماري يك گياه دارويي ، كه تكثير سلول هاي بنيادي را تحريك مي كند. لذا اين مطالعه با هدف تعيين اثر عصاره رزماري بر تكثيرو بقاء سلول هاي بنيادي چربي انساني (hASCs) صورت گرفت . مواد و روش ها در اين مطالعه تجربي، بافت چربي از خانم هاي سزاريني بيمارستان دامغان، جدا شد. سلول هاي استخراج شده در محيط كشت -MEMα Alpha-Dulbecco’s modified minimal essential medium حاوي 10% سرم جنين گاوي كشت داده شدند. بنيادي بودن سلول ها، با روش فلوسايتومتري و بيان ماركرهاي CD90, CD73, CD105, CD44, CD34, CD45 در تعداد 106 سلول و پتانسيل تمايزي آنها تاييد شد. ميزان بقاء و تكثير سلول هاي تيمار شده با غلظت هاي µg/ml 30، 40، 50، 60 و 70 ميكرو گرم بر ميلي ليتر عصاره رزماري حاوي 40 درصد كارنوسيك اسيد به مدت 24 و 48 ساعت با استفاده از تكنيك هاي هموسايتومتري ، MTT و PCR ارزيابي شد.MTT: [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide] PCR: Polymerase chain reactionداده ها با آناليز واريانس يكطرفه(ANOVA)و آزمونTukey بررسي شد و سطح معني داري 0.05 P≤ در نظر گرفته شد. يافته ها : سلول هاي hASCs كشت داده شده، در بررسي ميكروسكوپي ظاهري دوكي شكل و فيبروبلاستي از خود نشان دادند و پاسخ مثبت به ماركرهاي CD44، CD73، CD90، CD105 و پاسخ منفي به ماركرهاي CD34 و CD45 دادند. همچنين قابليت تمايز به سلول هاي چربي و استخواني در آنها اثبات شد. سرعت تكثير و ميزان بقاء سلول هاي تيمار شده با رزماري در غلظت µg/m50 و به مدت 48 ساعت افزايش معني داري 0.05 P≤را در مقايسه با سلول هايي كه در محيط فاقد رزماري وحاوي سرم كشت داده شده بودند، نشان داد. نتيجه گيري عصاره رزماري به عنوان مكمل سرم مي تواند سرعت تكثير و بقاء hASCs را افزايش دهد و بدين ترتيب سلول هاي مناسب تري براي پيوند خواهند بود.

Introduction: Rosemary leaf extract, as a medicinal plant, can stimulate stem cells proliferation. Human adipose stem cells (HASCs) are readily available and less harmful accessibility with high therapeutic application. Methods: In this study, fat tissue was isolated from Caesarean women at Damgan Hospital. After mechanical and enzymatic digestion, extracted cells were cultured in α–MEM containing 10% FBS. Stemness of HASCs was confirmed by flow cytometry and their differentiation potential. The survival rate, proliferation and neurotrophins genes expression of cells treated with 30, 40, 50, 60 and 70 μg/ml concentrations of Rosemary extract containing 40% of carnosic acid for 24 and 48h were evaluated using hoemocytometry, MTT and PCR assays. Results: Cultured HASCs showed spindle and fibroblastic shapes under microscopic study. They expressed positive response to CD44, CD73, CD90, CD105 and negative response to CD34 and CD45markers and differentiated into adipocytes and osteocytes. The proliferation rate and survival of cells treated with Rosemary at a concentration of 50 μg/ml for 48 h were increased significantly as compared to cultured cells in medium without Rosemary, containing serum. Conclusion: Rosemary extract could be used as a serum supplement to prepare more suitable cells for transplantation.