ارزيابي زنده ماني سلول هاي بنيادي مزان شيمي مشتق از بافت چربي در محيط كشت شبيه سازي شده ديابت

Evaluating the Viability of Adipose Tissue-derived Mesenchymal Stem Cells in Diabetic Culture Media Model

در ديابت سلولهاي بنيادي با شرايط نامساعد بافتي مواجهه هستند كه برخي از آنها عبارتند از غلظت بالاي گلوكز در خارج سلول، استرس اكسيداتيو و محروميت از فاكتورهاي رشدمتعاقب ايسكمي. هدف از اين مطالعه بررسي تاثير اين شرايط بر سلولهاي بنيادي است. روش كار : سلولهاي بنيادي از بافت چربي زيرجلدي موشهاي صحرايي جدا گرديد. براي شبيه سازي حالت هيپرگليسمي، سلولها 24 ساعت در محيط كشت حاوي mM 50 - 25 گلوكز نگهداري شدند. براي ايجاد مدل ايسكمي، سلولها براي 12 الي 36 ساعت در محيط فاقد گلوكز و فاكتورهاي رشد تيمار شدند. به منظور القاي استرس اكسيداتيو، 2O2H با غلظت μM 800 - 100 براي 24 ساعت به محيط سلولها اضافه شد. زندهماني سلولها با آزمون تيازوليل بلو تترازوليوم تعيين گرديد. يافته ها افزايش گلوكز محيط از mM 25 به mM 50 اثري بر زندهماني سلولهاي بنيادي نداشت. درصد سلولهاي زنده پس از 12 ، 24 و 36 ساعت مجاورت با محيط فاقد گلوكز و فاكتورهاي رشد كاهش يافت 05 / 0 > P غلظتهاي μM 400 و μM 800 از 2O2H درصد سلولهاي زنده را كاهش داد 05 / 0 > P . افزايش غلظت گلوكز محيط كشت سميت سلولي ناشي از 2O2H را افزايش نداد. نتيجه گيري : سلولهاي بنيادي در كوتاه مدت به استرس اكسيداتيو و محروميت از گلوكز و فاكتورهاي رشد حساستر از سميت ناشي از گلوكز زياد هستند. بنابراين، راديكالهاي آزاد اكسيژن و اختلالات خونرساني از علل اصلي آسيب سلولهاي بنيادي و لذا كاهشترميم بافتي در ديابت است.

In diabetes mellitus, stem cells are exposed to inappropriate conditions such as an increase of glucose in extracellular space, oxidative stress, and deprivation from growth factors (following ischemia). This study was aimed to evaluate the effect of these conditions on stem cells. Methods: Stem cells were isolated from subcutaneous adipose tissue of rats. The cells were maintained for 24 h in culture medium containing 25-50 mM glucose to simulate hyperglycemic condition. For the induction of the ischemic model, the cells were incubated for 12-36 h with the medium deprived of glucose- and growth factors. To induce oxidative stress, H2O2 was added at concentrations of 100-800 μM to the medium of the cells for 24 h. The cell viability was determined using the Thiazolyl blue Tetrazolium Bromide assay. Results: The increase in the glucose of culture medium from 25 mM to 50 mM did not affect the viability of stem cells. The percent of viable cells was significantly decreased after 12, 24, and 36 h incubation with glucose- and growth factors-free medium (P < 0.05). Concentrations of 400 and 800 μM of H2O2 significantly decreased the percent of viable cells (P < 0.01). The increase in the glucose of culture medium did not further enhance H2O2 cytotoxicity. Conclusions: In a short time, stem cells are more vulnerable to oxidative stress and deprivation from glucose and growth factors compared to glucotoxicity. Therefore, reactive oxygen radicals and blood flow disorders are of the main causes of stem cell damage and, as a result, reduced tissue regeneration in diabetes.