بهينه‏سازي كدوني و مقايسه‏ي بيان فاكتور رشد عصبي بتا انساني (β-NGF) بصورت نوتركيب در ميزبان‏هاي باكتريايي BL21(DE3)pLysS و BL21(DE3)

فاكتور رشد عصبي بتا (β-NGF) براي اولين بار بدليل نقش حياتي‌اش در رشد و بقاي سلول‏هاي عصبي مورد مطالعه قرار گرفت. اين پروتئين كه به خانواده‌ي نوروتروفين‌ها تعلق دارد در درمان بيماري‌هاي تخريب عصبي نظير آلزايمر داراي نقش قابل ملاحظه‏اي مي‏باشد. بدين منظور، β-NGF انساني نوتركيب براي اولين‏بار در ايران در دو سويه‏ي متفاوت باكتري E.coli بيان شد. از آنجاييكه β-NGF در ساختار فعال و عملكردي خود داراي سه پيوند دي‏سولفيدي است، محيط احيا كننده‏ي سيتوپلاسم E.coli براي بيان آن مناسب نمي‌باشد. بنابراين، محيط اكسيد كننده‌ي پري‏پلاسم جهت توليد β-NGF همراه با تاخوردگي صحيح مورد توجه قرار گرفت. در اين تحقيق، cDNA β-NGFانساني بدست آمده از بانك اطلاعاتي NCBI پس از بهينه‌سازي كدوني و ساب كلونينگ در وكتور pET39b(+)، حاوي ژن دي سولفيد ايزومراز A، به روش ترنسفورماسيون (شوك حرارتي) به سويه‌هاي BL21(DE3)pLysS و BL21(DE3) انتقال يافت. بيان همزمان با استفاده از القاي پروموتر با غلظت‌ 1 ميلي مولار IPTG صورت گرفت. سپس، محتواي پروتئيني استخراج شده از دو سويه‏ي مذكور با استفاده از تكنيك‌هاي SDSPAGE و دات بلات با يكديگر مقايسه گرديد. نتايج نشان دهنده بيان، بويژه در سويه باكتريايي BL21(DE3) مي باشد.