عنوان مقاله :
جداسازي و همسانه سازي ژن 3 -هيدروكسي3 -متيل گلوتاريل كوآنزيم A ردوكتاز از گياه رازيانه (Foniculum Vulgar)
پديد آورندگان :
ساعد موچشي ، كژوان دانشگاه تهران، پرديس ابوريحان - گروه علوم زراعي و اصلاح نباتات , ايزدي دربندي ، علي دانشگاه تهران، پرديس ابوريحان - زراعت و اصلاح نباتات , رامشيني ، حسين دانشگاه تهران، پرديس ابوريحان - زراعت و اصلاح نباتات
كليدواژه :
همسانه سازي , ژن 3 , هيدروكسي3 , متيل گلوتاريل كوآنزيم A ردوكتاز , ايزوپرنوئيد , رازيانه
چكيده فارسي :
در گياهان تركيبات ايزوپرنوئيدي توسط دو مسير مستقل، شامل مسير موالونات (MVA) و مسير 2-C-متيل-D-اريترول 4-فسفات (MEP) سنتز مي شوند. اين فرآورده ها براي رشد و نمو طبيعي گياه و واكنش آن‌ها در برابر تنش هاي زيست محيطي مورد نياز است. اولين مرحله در مسير بيوسنتز ايزوپرنوئيدهاي گياهي، تبديل 3-هيدروكسي3-متيل گلوتاريل كوآنزيمA (HMG-COA) به موالونات است؛ كه توسط آنزيم 3-هيدروكسي3-متيل گلوتاريل كوآنزيمA ردوكتاز (HMGR) انجام مي شود. در اين تحقيق پس از تعيين نواحي حفاظتي ژن هاي هم خانواده آن،آغازگرهاي اختصاصي براي تكثير اين ژن طراحي شد. ژن HMGR از اكوتيپ ساري گياه رازيانه توسط واكنش زنجيره‌اي پليمراز به‌دست آمد و فراورده حاصل از طريق همسانه سازي TA تكثير شد. تجزيه و تحليل بلاست نوكلئوتيد (BLASTn) توالي تكثيرشده، نشان داد كه اين فرآورده مشابهت زيادي با ساير HMGR هاي گياهي، به‌خصوص 3-هيدروكسي3-متيل گلوتاريل كوآنزيمA ردوكتاز گياه آب قاشقي دارد. توالي تكثيرشده ژن HMGR در گياه رازيانه داراي طولي برابر با 1661 جفت‌باز است و ناحيه رمز كننده اي به طول 1589 جفت باز (داراي دو دمين گذرنده و يك دمين كاتاليزوري) را شامل مي شود. ناحيه ORF اين توالي، رمزكننده ي قطعه پروتئيني به طول 553 اسيد آمينه با جرم مولكولي حدود 816/59 كيلو دالتون و نقطه ايزوالكتريك 40/8 بود. مدل‌سازي مولكولي توالي با استفاده از سرور Model Swiss نشان داد كه توالي تكثير شده، يك نوع جديد HMGR است كه داراي يك ساختار فضايي شبيه به ديگر HMGRهاي گياهي است و داراي تمامي دمين‌هاي ساختاري و كاركردي مي‌باشد. با دسترسي به توالي اين ژن در رازيانه، امكان بررسي الگوي بيان آن در اندام‌هاي مختلف، تعيين پلي مورفيسم آن در جمعيت‌هاي اين گياه و توليد سازه بياني جهت انتقال ژن وجود دارد.
