توليد شكل نوتركيب گلوتاردوكسين گياه برنج در باكتري اشريشياكلي

گلوتاردوكسين ها (Grx ها) ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻫﺎيﯽ ﺑﺎ وزن ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ پايين ﻫﺴﺘﻨﺪ ﮐﻪ ﺑﺎ داﺷﺘﻦ يﮏ ﮔﺮوه ﺗﯿﻮلدي ﺳﻮﻟﻔﯿﺪ در ﺟﺎيﮕﺎه ﻓﻌﺎﻟﺸﺎن در اﺣﯿﺎ ﺑﺮﮔﺸﺖ ﭘﺬيﺮ ﭘﯿﻮﻧﺪﻫﺎي دي ﺳﻮﻟﻔﯿﺪي ﻧﻘﺶ دارﻧﺪ. اين پروتئين ها توسط آنزيم گلوتاتيون ردوكتاز توسط مولكول گلوتيون احيا مي شوند. سپس اين پروتئين خود در احياي باندهاي دي سولفيدي پروتئين هاي ديگر دخالت دارد. ايﺰوﻓﺮم ﻫﺎي ﻣﺨﺘﻠﻔﯽ از Grx در ﮔﯿﺎﻫﺎن وﺟﻮد دارد. در ﭘﮋوﻫﺶ ﺣﺎﺿﺮ ﺗﻮاﻟﯽ ژن كد كننده ايﺰوﻓﺮم OsGrx9 از ﮔﯿﺎه ﺑﺮﻧﺞ ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ ﺑﯿﺎﻧﯽ pET28a، ﻫﻤﺴﺎﻧﻪ ﺳﺎزي و ﺳﭙﺲ ﺑﻪ ﺳﻮيﻪ ي ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﺑﺎﮐﺘﺮي اﺷﺮيﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ ﺑﻪ ﻧﺎم (DE3) Rosetta ﻣﻨﺘﻘﻞ ﺷﺪ. ﺑﺎ ﺗﺤﺮيﮏ ﭘﺮوﻣﻮﺗﺮ T7 ﺑﻪ وﺳﯿﻠﻪي IPTG، ﻣﯿﺰان ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ HisOsGrx9 در فاز محلول باكتري ﺗﻮﻟﯿﺪ شد و سپس ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از روش ﮐﺮوﻣﺎﺗﻮﮔﺮاﻓﯽ تمايلي ﺧﺎﻟﺺ ﺳﺎزي ﺷﺪ .ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ اﺣﯿﺎيﯽ اين ايﺰوﻓﺮم ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ ﺗﻮﻟﯿﺪ ﺷﺪه ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از اﻧﺴﻮﻟﯿﻦ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﺳﻮﺑﺴﺘﺮاي اﻟﮑﺘﺮون ﮔﯿﺮﻧﺪه و حضور DTTيا GSH ﺑﻪ ﻋﻨﻮان عوامل اﺣﯿﺎ ﮐﻨﻨﺪه مورد بررسي قرار گرفت. نتايج نشان داد كه Grx9 در محيط اين ويترو به خوبي فعال مي باشد. به نظر مي رسد فعاليت اين پروتئين در حضور GSH كاملا وابسته به pH محيط مي باشد.