تأثير آنتي اكسيداني و پرواكسيداني آمينوگوانيدين بر رده سلولي سرطان كبد انسان (HepG-2)

Antioxidant and Pro-oxidant Effects of Aminoguanidine on HepG-2 Hepatocellular Carcinoma Cell Line

سابقه و هدف: HCC(هپاتوسلولاركارسينوما) يكي از كشنده‌ترين سرطان‌ها است و به همين دليل يافتن مكانيسم‌هاي جديد ضدسرطان براي آن بسيار مهم مي‌باشد. با افزايش ROS (گونه‌هاي واكنش‌گر اكسيژن) سلول به سمت آسيب و مرگ سلولي مي‌رود. آمينوگوانيدين (پيماگدين) تركيبي است كه مي‌تواند در غلظت‌هاي بالا باعث توليد ROS شود. مطالعه حاضر به منظور بررسي تاثير آمينوگوانيدين بر ميزان توليد ROS و زنده ماني در سلول‌هاي كبدي انجام شد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، ميزان زنده ماني سلول‌هاي HepG-2 با روش MTT بررسي شد. ميزان ROS با روش فلوريمتري و با استفاده از رنگ DCFDA اندازه گيري و با ميكروسكوپ فلورسانس عكس‌برداري شد. يافته‌ها: آزمون MTT تقريباً 50 درصد كاهش، درفعاليت متابوليكي سلول‌ها را در غلظت 40 ميلي‌مولار (2/5 ± 8/54) آمينوگوانيدين بعد از 24 ساعت نشان داد. نتايج آزمون ROS نشان داد كه آمينوگوانيدين در دوزهاي بالاتر از 40 ميلي مولار با الگوي وابسته به غلظت، قادر به افزايش ميزان توليد ROS در مقايسه با كنترل مي‌باشد. استنتاج: با توجه به اين‌كه آمينوگوانيدين موجب افزايش ميزان توليد ROS و كاهش درصد زنده ماني سلول‌ها در غلظت 40 ميلي‌مولار و بالاتر شد، لذا مي‌تواند باعث القاي مسيرهاي ديگر سلولي شامل اكسيداتيو و نيتروزاتيو استرس، آپوپتوز و نكروز در سلول شود. از طرفي مشاهده شد كه آمينوگوانيدين در غلظت‌هاي پايين‌تر از 40 ميلي‌مولار مي‌تواند به صورت آنتي اكسيدان نيز عمل كند كه بررسي اين رفتار جالب دوگانه نياز به مطالعات بيش‌تري دارد

Background and purpose: Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most fatal cancers, so, proposing new anticancer agents is highly valuable. Production of reactive oxygen species (ROS) is increased in majority of cancers. Increase in ROS leads to cell damage and death. Aminoguanidine (AG) (pimagedine) is one of the compounds that can produce ROS at high concentrations. The present study was conducted to evaluate the effect of aminoguanidine on HepG-2 cell survival and ROS production. Materials and methods: HepG-2 cell were cultured in complete culture medium. To evaluate the viability, MTT assay was done through spectrophotometry. ROS production was measured by fluorimetry using DCFDA dye, and photographs were taken using fluorescent microscope. Results: MTT assay showed 50% decrease in metabolic activity in the cells treated with aminoguanidine 40 mM (54.8±5.2) after 24 hours. Additionally, the results of ROS measurements showed that ROS formation increased by the elevation of aminoguanidine at concentrations above 40 mM. Conclusion: Aminoguanidine could increase ROS production and decrease the cell viability at 40 mM and higher concentrations, therefore, it can induce other cellular pathways including oxidative and nitrosative stress, apoptosis, and necrosis in HepG-2 cells. Interestingly, AG showed antioxidant potentials in concentrations lower than 40 mM and further investigations are needed to clarify this pattern.