بيان پروتئين پوششي ويروس ايراني پيچيدگي بوته چغندرقند در باكتري Escherichia coli

بيماري پيچيدگي بوته چغندرقند در ايران با دو گونه ويروس ايراني پيچيدگي بوته چغندرقند (Beet curly top Iran virus, BCTIV) و ويروس پيچيدگي بوته چغندرقند (BCTVBeet curly top virus,)ايجاد مي شود. به منظور بيان پروتئين پوششي BCTIV، قطعه كامل چارچوب خوانش V1 اينويروس، با تعبيه محل هاي برشي دو آنزيم Bam HIو Hind III به ترتيب در انتهاي ¢5 آغازگرهاي اختصاصي رو به جلو و معكوس چارچوب خوانش V1، تكثير شد. قطعه 751 جفت بازي محصول واكنش زنجيره اي پلي مراز، خالص شده و در ناقل همسانه سازي pTZ57R/T جاي داده شد. توالي چارچوب خوانش V1 با واكنش هضم آنزيمي از ناقل همسانه سازي جدا و در ناقل بيان باكتريايي pQE30 همراه با يك دنباله هيستديني در انتهاي آميني، جاي داده شد. پلاسميدهاي نوتركيب حاوي توالي 6×His-V1، با استفاده از روش شوك الكتريكي به سلول هاي سويه M15 باكتري Escherichiacoli انتقال داده شدند. القاي بيان توالي چارچوب خوانش V1 با استفاده از افزودن ايزوپروپيلتيو-دي-گالاكتوزيدبه محيط كشت LB مايع حاوي سلول هاي تراريخت باكتري صورت پذيرفت. الكتروفورز عمودي در ژل پلي آكريل آميد حاوي SDS، نشان دهنده وجود يك باند پروتئيني قوي به اندازه تقريبي 30 كيلودالتون بود كه با وزن مولكولي مورد انتظار براي پروتئين پوششي BCTIV همخواني داشت. آزمون لكه‌گذاري پروتئين با استفاده از آنتي بادي آنتي -هيستدين، صحت پروتئين بيان شده را به اثبات رساند. با توجه به ميزان بالاي خسارت حاصل از اين ويروس ها در كشت چغندرقند، استفاده از پروتئين پوششي بيان شده BCTIVدر توليد آنتي بادي اختصاصي مي تواند روشي سريع، ارزان و ساده را براي شناسايي ويروس هاي پيچيدگي بوته چغندرقند در آزمون‌هاي سرولوژيكي از جمله اليزا فراهم آورد.