تفكيك سويه هاي ويروس بيماري بورس عفوني جداشده از گله هاي طيور ايران به وسيله آناليز منحني ذوب با دقت بالا (High Resolution Melt)

زمينه مطالعه: بيماري بورس عفوني (Infectious bursal disease, IBD) بيماري با واگيري بسيار بالا در طيور جوان است. براي صنعت طيور، تمايز بين جدايه هاي كلاسيك حاد و فوق حاد ويروس IBD اهميت زيادي دارد تا برنامه مناسبي براي واكسيناسيون اتخاذ شود. تست هاي سرولوژيك و مولكولي معمول بسيار پرزحمت، زمان بر و از نظر حساسيت متغير مي باشند. اين در حالي است كه منحني ذوب با دقت بالا روشي نسبتا سريع مي باشد. هدف: اين مطالعه براي تعيين ميزان كارآئي روش منحني ذوب با دقت بالا براي تفريق جدايه هاي مختلف بر روي تعدادي از جدايه هاي ايراني ويروس IBD كه قبلا ماهيت آنها با استفاده از روش آناليز RTPCR/RFLP (با استفاده از پرايمرهاي پروتئين VP2) و آناليز سكانس براي ما مكشوف بود، طراحي شد. روش كار: در اين مطالعه از جدايه هاي ويروس IBD براي آزمون بررسي ذوب با دقت بالا در محدوده دمايي 81 تا 92 درجه سانتي گراد پس از انجام استخراج RNA و رونوشت برداري معكوس و Real Time RT PCR ‌استفاده شد. نتايج: با بررسي منحني ذوب، ويروس هاي آزمايش شده در چهار گروه AD دسته بندي شدند. سه سويه واكسينال D78، Gumbokal و Bursa CE در گروه A ، واكسن IBD L در گروه B ، سويه واكسينال Bursine 2 در گروه C و تمامي ويروسهاي فيلد در گروه D قرار گرفتند. آناليز نتايج منحني ذوب با دقت بالا پس از نرمال كردن نيز نشان داد كه ويروس هاي اين مطالعه در چهار گروه ژنوتيپي HRM قرار گرفتند و سه ويروس D78، Gumbokal و Bursa CE منحني مشابه هم و غير قابل تفكيك از هم ايجاد كردند. اما از ساير واكسنها يا سويه هاي فيلد متمايز بودند. همچنين دو سويه IBD L و Bursine 2 داراي دو منحني متفاوت و متمايز از ساير ويروس ها بودند. نتيجه گيري نهائي: از مطالعه كنوني مي توان نتيجه گرفت كه تكنيك بررسي منحني real-time RT-PCRHRM روشي مقرون به صرفه و قابل اعتماد در بين روش هاي مورد استفاده در حال حاضر است و به منظور شناسايي حدت جدايه هاي جديد ويروس بورس عفوني مي تواند مورد استفاده قرار گيرد.