شناسايي مولكولي انگل ليشمانيا در اسميرهاي منفي بيماران مبتلا به ليشمانيوز پوستي در شهرستان بم، جنوب شرق ايران

Molecular Detection of Leishmania spp. in Negative Smears of Patients with Cutaneous Leishmaniasis in Bam, Southeast Iran

سابقه و هدف: با توجه به وجود اشكال باليني مختلف ليشمانيوز پوستي و عدم دسترسي به روش‌هاي تشخيصي مولكولي به ويژه در آزمايشگاه‌هاي تشخيصي مناطق آندميك، مطالعه حاضر با هدف شناسايي مولكولي انگل ليشمانيا در اشكال معمول و غير معمول باليني ليشمانيوز پوستي در منطقه اندميك بم انجام شد. مواد و روش‌ها: اين مطالعه مقطعي طي سال هاي 1393-1392 انجام شد. تشخيص بيماري با تهيه اسمير از زخم‌هاي پوستي، رنگ آميزي گيمسا و بررسي ميكروسكوپي صورت گرفت. از اسميرهاي مثبت و منفي بيماران DNA استخراج و سپس جهت تعيين جنس و گونه انگل ليشمانيا آزمايش PCR انجام شد. يافته‌ها: در اين مطالعه 353 بيمار مشكوك به ليشمانيوز پوستي مراجعه كننده به مركز بهداشت شهرستان بم مورد بررسي قرار گرفتند كه 278 نفر(7/78 درصد) در بررسي ميكروسكوپي مثبت بودند. در بررسي مولكولي، 40 اسمير تهيه شده از زخم‌هاي معمول بيماران با هر دو روش ميكروسكوپي و PCR مثبت شدند اما از 40 نمونه تهيه شده از زخم‌هاي غير معمول كه در بررسي ميكروسكوپي منفي بودند، در 6 مورد (15 درصد) DNA انگل ليشمانيا شناسايي شد. گونه شناسايي شده در تمامي نمونه هاي مثبت، ليشمانيا تروپيكا بود. استنتاج: نتايج اين مطالعه نشان داد كه انجام آزمايش مستقيم ميكروسكوپي براي تشخيص سالك در مناطق آندميك به اندازه كافي قابل اعتماد نيست. علاوه بر اين، انجام PCR بر روي اسمير منفي افراد مشكوك به منظور درمان به موقع توصيه مي شود.

Background and purpose: There are various clinical forms of cutaneous leishmaniasis (CL) and there is lack of access to diagnostic local laboratories especially in endemic regions. The present study aimed to conduct molecular examination of the typical and atypical clinical forms of CL in endemic area of Bam, Iran. Materials and methods: This cross-sectional study was carried out between 2013 and 2014. The diagnosis was performed by direct smears from skin lesions, Giemsa staining, and microscopic examination. Total DNA was extracted from positive and negative direct smears. PCR method was used to determine the genus and species of Leishmania. Results: In this study, 353 suspected cases of CL in Bam Health Center were investigated of whom 278 (78.7%) were positive by microscopic examination. Forty skin smears from typical lesions were positive by both PCR and microscopic examinations, but out of 40 skin smears from atypical lesions which were negative by microscopic observation, Leishmania DNA was detected in 6 (15%) samples. Leishmania tropica was identified in all positive samples. Conclusion: In current study, microscopy method was not found reliable enough for diagnosis of CL. Therefore, for early diagnosis of the disease PCR is recommended in negative smears of patients suspected of CL.