تكثير و همسانه سازي ژن آلفا توكسين باكتري كلوستريديوم پرفرينجنس در باكتري E. Coli

اهداف: هدف از انجام اين پژوهش، تكثير و همسانه سازي شكل كامل و همچنين بخش ابتدايي ژن كشنده آلفا توكسين (α-Toxin) باكتري كلستريديوم پرفرِينجنس با اندازه هاي به ترتيب 1100 و 750 جفت باز با استفاده از ناقل بياني pET28a در باكتري E.coli بود. مواد و روش ها: استخراجDNA ژنومي با استفاده از كيت كياژن صورت گرفت. آغازگرهاي جلوبرنده و برگشت در آزمايشگاه طراحي و در ناحيه ابتدايي آغازگرها رديف هاي آنزيم هاي برشگر HindIII و XhoI مطابق با ناحيه كلونينگ پلاسميد مورد نظر اضافه گرديد. قطعات ژني مورد نظر با روش PCR معمولي تكثير و در ناقل pET28a با كمك روش شوك حرارتي كلون شدند. استخراج DNA پلاسميدي با استفاده از روش ليز قليايي صورت گرفت. نتايج: نتايج ژل الكتروفورز محصولات PCR، تكثير واضح و واحد شكل كامل و همچنين بخش ابتدايي قطعات ژني مورد نظر را مطابق با اندازه هاي مورد انتظار نشان داد. بعلاوه با استفاده از آزمايش هضم آنزيمي منفرد و دوگانه توسط آنزيم هاي برشگر HindIII و XhoI همسانه سازي ژنهاي آلفا توكسين در باكتري ميزبان و توليد باكتريهاي نوتركيب تأييد شد. نتيجه گيري: با توجه به موفقيت آميز بودن دقيق كلونينگ ژنهاي آلفا توكسين در باكتري هاي بياني ميزبان، مي توان گفت كه پرايمرهاي طراحي شده در اين تحقيق براي تكثير ژن آلفا توكسين بسيار اختصاصي بوده و به عنوان ماركر شناسايي و طبقه بندي اين باكتري ها مي توانند استفاده واقع شوند. همچنين با ساخت احتمالي واكسن هاي نوتركيب ژنتيكي مهندسي شده مي توان كنترل و مقابله با پاتوژن هاي مهمي همچون باكتري كلستريديوم پرفرينجنس را امكان پذير ساخت.