بيان توالي كدكنندۀ پروتئين شيمريك ipaD-stxB در باكتري E. coli و كاهو

Expression of Schemeric Protein Coding ipaD+stxB in E.coli and Lettuce

شيگلوز، يك بيماري عفوني است كه توسط شيگلا ايجاد مي ­شود. پروتئينIpaDيكي از مهم‌ترين عامل‌هاي بيماري‌زا در شيگلا است. براي توليد پروتئين نوتركيب، توالي كدكنندۀ ipaD-stxB همسانه سازي و به ناقل بياني pET28a(+) منتقل و توسط PCRو هضم آنزيمي تأييد شد. بيان پروتئين نوتركيب در باكتري (BL21)E. coli با SDS-PAGE، آزمون الايزا و لكه‌گذاري وسترن تأييد شد. در اين تحقيق پروتئين نوتركيب حدود 54.87 درصد پروتئين كل باكتري را به خود اختصاص داد. ناقل بياني گياهي واجد توالي كدكنندۀ ipaD-stxB با روش Golden Braid 3.0ساخته و با كمك اگروباكتريوم سويۀ C58 در كاهو به‌صورت موقت بيان شد. بيان پروتئين نوتركيب ipaD-stxBدر سطح رونويسي (ترانسكريپتوم) با qRT-PCRودر سطح پروتئين با آزمون الايزا تأييد شد.

Shigella dysenteriae as the primary cause of epidemic diarrhea have been reported. Shigellosis is an infectious disease caused by Shigella. The IpaD protein is one of the most important virulence factors in Shigella. For production of recombinant protein, coding sequence of ipaD+stxB cloned to pET28(a) exprsson vector and cloned gene confimed by PCR and restriction enzyme digestions. Coding sequence expressed in E. coli (BL21) was confirmed by SDS-PAGE, ELISA and Western blot. The recombinant protein accounted for about 54.87% of total bacterial proteins. Plant exprssion vector constructed via Golden Braid method. Transient expression of ipaD+stxB in lettuce performed with agrobacterium C58 strain and was confirmed at the level of transcriptome and protein through RT-PCR and ELISA assay.