ارزيابي نوع ريزنمونه و فصل نمونه‌گيري تحت تأثير تيمارهاي مختلف ضدعفوني به‌منظور كشت بافت شمشاد خزري (Buxus hyrcana Pojark.)‌

Evaluation type of explants and season of sampling under different disinfection treatments for the tissu culture of Buxus hyrcana Pojark

اين پژوهش با هدف يافتن بهترين ريزنمونه و فصل نمونه ­برداري تحت تأثير تيمارهاي مختلف سترون­سازي براي دست­يابي به دستورالعمل مناسب و بهينه براي پژوهش ­هاي كشت بافت شمشاد خزري انجام شد. ريزنمونه­ هاي برگ و ساقه از بخش­هاي مختلف گياه تهيه شدند. ابتدا پيش ­­تيمارهاي ضدعفوني ريزنمونه ­ها و شستشوي اوليه با آب معمولي داراي چند قطره مايع ظرف­شويي به ­مدت چهار تا پنج دقيقه به ­منظور حذف آلودگي­هاي سطحي انجام شد. سپس در زير هود استريل سترون­سازي با استفاده از 13 تيمار مختلف انجام شده و بعد از اعمال هر تيمار، پنج بار با آب مقطر استريل آبشويي و در پايان ريزنمونه ­هاي مناسب از مواد گياهي جدا و روي محيط كشت PDA در داخل ­پتري­هاي استريل در كنار شعله قرار داده شدند. براي اندازه­گيري آلودگي، كشت­ ها در اتاق رشد با دمايي معادل 1±26 درجه سانتي­گراد با شدت نور 1000 تا 1500 لوكس و تاريكي مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج نشان داد ريزنمونه ­هاي فصل بهار نسبت به فصل پاييز داراي آلودگي ميكروبي كمتري هستند. از طرفي ريزنمونه­ هاي برگي نسبت به ريزنمونه ­هاي ساقه درصد آلودگي كمتري از خود نشان دادند.

The aim of this study was to find the best explants and sampling period under different sterilization treatments in order to achieve a suitable and optimal protocol for tissue culture studies in Buxus sp. Explants were prepared from different parts of the plant, including leaves and stems. At first, detergent disinfection treatments and initial washing with ordinary water containing a few drops of liquid dish for four to five minutes were performed to remove surface contamination. The Explants were flushed with distilled water five times. Then, under laminar Floe sterilization, use 13 different treatments and disinfect five times each treatment with distilled autoclaved leachate and at the end of the appropriate samples (leaf samples of 0.5 to 1 cm Squares and stem samples of 5 to 10 mm) were isolated from plant material and placed on a PDA medium inside autoclaved petri dishes alongside a flame. In order to measure the contamination, cultures in a growth room with a temperature of 26 ± 1 ° C with a light intensity of 1000 to 1500 lux and dark (incubator) were investigated. The results showed that samples of spring season have less microbial contamination than those in the autumn season. On the other hand, leaf samples showed less contamination percentage compared to stem explants.