پديد آورندگان :
كريميان، فرزانه دانشگاه آزاد اسلامي - دانشكده علوم زيستي - گروه ميكروبيولوژي، فلاورجان , قرباني، محمدحسن دانشگاه آزاد اسلامي - دانشكده علوم زيستي - گروه بيوشيمي، فلاورجان , ميرداماديان، حسين دانشگاه آزاد اسلامي - دانشكده علوم زيستي - گروه ميكروبيولوژي، فلاورجان
كليدواژه :
آنزيم‌هاي هيدروليتيك , باسيلوس تورنجينسيس , سنجش فعاليت , ليپاز
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: ليپازها مهم‌ترين آنزيم‌هاي هيدروليتيك توليد شده توسط ميكروارگانيسم‌هاي مختلف به ويژه باكتري‌ها هستند كه در صنايع غذايي و دارويي كاربردهاي گسترده اي دارند. هدف از اين مطالعه، جداسازي و شناسايي باكتري‌هاي مولد ليپاز از منابع در دسترس به منظور استفاده در صنعت است.
مواد و روش‌ها: نمونه‌برداري و جداسازي باكتري‌هاي مولد آنزيم ليپاز از پساب و خاك تصفيه‌خانه حبيب‌آباد، پساب و لجن فيلتر شني كارخانه روغن نباتي گلبهار، دنبه و كنجاله‌هاي كنجد صورت گرفت. به منظور سنجش ميزان توليد و فعاليت آنزيم‌هاي ليپازي، از روماند به‌دست آمده از كشت باكتري در محيط كشت پايه ليپيدي استفاده گرديد. سپس مقدار آنزيم موجود در روماند توسط سنجش كمي فعاليت آنزيمي با استفاده از تكنيك اسپكتروفتومتري و سوبستراي اختصاصي پارانيتروفنيل استات در دماي 28 درجه سلسيوس صورت گرفت. شناسايي باكتري توسط آناليزهاي ماكروسكوپي، ميكروسكوپي و مولكولي انجام شد.
يافته‌ها: بر اساس نتايج غربال‌گري سويه‌هاي جداسازي شده و همچنين ارزيابي‌هاي آنزيمي، سويه 31 به‌عنوان سويه برتر انتخاب گرديد. با استفاده از آناليز مولكولي 16S rRNA اين جدايه به‌عنوان باسيلوس تورنجينسيس L26 تعيين شد. بيشترين پايداري و فعاليت آنزيمي در اين سويه در دماي 48 درجه سلسيوس، 8.5 pH و به ترتيب در حضور كلريد سديم ، كلريد كلسيم، كلريد پتاسيم ، كلريد منيزيم، سولفات روي و كلريد منگنز به دست آمد.
نتيجه گيري: نتايج اين پژوهش نشان داد آنزيم ليپاز باسيلوس تورنجينسيسL26 در شرايط قليايي و در حضور كاتيون هاي مختلف پايداري متفاوتي دارند.
چكيده لاتين :
Background & Objectives: Lipases are important hydrolytic enzymes produced by various microorganisms such as bacteria. This enzyme is applied in various industries including food and pharmaceutical industries. This study aimed to isolate and identify lipase-producing bacteria from various sources to use in different industries.
Materials & Methods: Sampling and screening of lipase- producing bacteria were carried out from wastewater and soils of Habib-abad refinery, wastewater and slugs of Golbahar oil factory, sheep’s tail fat, and sesame meal. To evaluate the enzymatic activity, bacterial isolates were cultured in lipid-based media, where the supernatant was used for the next assay. A quantitative assessment of enzymatic activity was performed using a spectrophotometer, in the presence of para-nitrophenol acetate at the temperature of 28°C. The identification of bacterial isolates was carried out by macroscopic, microscopic and molecular analysis.
Results: Screening bacterial isolates and the results of enzymatic activity assays showed strain 31 as the superior one. Molecular analysis results identified this strain as Bacillus thuringiensis L26. The highest enzymatic activity and stability were obtained at the temperature of 48°C, pH value of 8.5, and in the presence of sodium chloride, calcium chloride, potassium chloride, magnesium chloride, zinc sulfate, and manganese chloride, respectively.
Conclusion: Our results showed the stability of tested lipase enzymes under alkaline conditions and the presence of different cations. Therefore, further complementary tests are recommended o assess practical uses.
