اثر سطوح مختلف لسيتين سويا بر كيفيت مني و نسبت جنسيت اسپرم گاو هلشتاين با تكنيك Real-time qPCR

The effect of different levels of soybean lecithin on semen quality and sex ratio of Holstien bull sperm by Real-time qPCR technique

هدف: پژوهش حاضر به ­منظور بررسي استفاده از سطوح مختلف لسيتين سويا در رقيق­ كننده تريس بر كيفيت مني و نسبت جنسيت با استفاده از تكنيك real-time qPCR اجرا شد. مواد و روش ها: نمونه ­گيري از چهار گاو نر نژاد هلشتاين، يك بار در هفته انجام شد و سپس نمونه­ هاي مناسب با هم مخلوط شدند. نمونه هاي اسپرم (در چهار تكرار) به سه گروه شامل صفر، يك و دو درصد لسيتين سويا اختصاص داده ­شد. و فراسنجه ­هاي كيفي و نيز نسبت جنسيت مني در آن­ها تعيين شد. در اين تحقيق به­ منظور شستشوي مني و حذف سلول­ هاي مرده، از تكنيك شنا به سمت بالا (Swim up) استفاده شد. ژن هاي PLP و SRY بهترتيب براي جداسازي قطعات خاصي از توالي هاي كروموزوم X- وY- تكثير شدند. در اين روش PAR به عنوان ژن مرجع جهت نرمال ­سازي داده ­هاي حاصل از بيان ژن در واكنش real- time qPCR استفاده شد. نتايج: نتايج پژوهش حاضر نشان داد كه تكنيك Swim up و سطوح مختلف لسيتين سويا موجب بهبود كيفيت مني شدند. علاوه براين، استفاده از تكنيك Swim up باعث كاهش معني­ دار بيان ژن (0/11±0/75) PLP و افزايش معني­ دار بيان ژن (1/37±0/13) SRY شد. اما استفاده از سطوح مختلف لسيتين سويا تغييري در نسبت جنسيت اسپرم ايجاد نكرد. نتيجه گيري: به طور كلي، لسيتين سويا يك جايگزين مناسب براي منابع حيواني بوده و موجب بهبود كيفيت مايع مني مي شود. با توجه به محدوديت هاي موجود در استفاده از منابع حيواني در رقيق كننده گاو، استفاده از لسيتين سويا به عنوان يك منبع گياهي پيشنهاد مي شود.

Aim: This study was designed to investigate the use of different levels of soybean lecithin in the Tris extender on semen quality and sex ratio using real-time qPCR technique. Material and Methods: Sampling of 4 Holstien bulls was performed once a week, then the appropriate samples were mixed. Samples of sperm (in 4 replications) were divided into three groups: zero, one and two percentage soybean lecithin. The qualitative parameters and the sex ratio of the semen were determined. Swim up technique was used to wash the semen and remove the dead cells. Moreover, the PLP and SRY genes were propagated to separate the specific fragments of X- and Ychromosomes sequences. In this procedure, PAR was used as a housekeeping gene to normalize the gene expression data in real-time qPCR. Results: The results showed that swim up technique and different levels of soybean lecithin improve the semen quality. In addition, swim up technique significantly reduced PLP gene expression (0.75±0.11), against increased SRY gene expression (1.37±0.13). However, using of different levels of soybean lecithin did not change the sex ratio of the sperms. Conclusion: In general, soybean lecithin is an appropriate substitute to animal sources and improves the quality of semen. Due to the limitations of using animal resources in bull extenders, the use of soybean lecithin as a plant source is suggested.