توليد برون سلولي آنزيم پراكسيداز در باكتري بومي Bacillus tequilensis و تعيين برخي ويژگي‌هاي بيوشيميايي آنزيم

Extracellular peroxidase enzyme production in native bacteria Bacillus tequilensis and determination of some biochemical properties of enzyme

اهداف:پراكسيدازها در طيف وسيعي از فرآيند هاي زيست فناوري مورد استفاده قرار مي گيرند كه بيشتر آنها در دما و pH هاي بالا انجام مي شوند. از آنجا كه بيشتر پراكسيدازهاي رايج در شرايط قليايي و دماي بالا ناپايدار و غيرفعال بوده يافتن پراكسيدازهاي ترموآلكالوفيليك براي اهداف كاربردي امري ضروري به نظر مي رسد. مواد و روش ها: در اين مطالعه توليد برون سلولي آنزيم پراكسيداز در سويه بومي Bacillus tequilensis مورد مطالعه قرار گرفت. براي اين منظور، فعاليت آنزيم با استفاده از دو سوبستراي 2,4-DCP و پيروگالول در كشت مايع باكتري سنجش و تاثير مدت زمان كشت بر توليد آنزيم و همچنين تاثير پارامترهاي pH و دما بر ميزان فعاليت آنزيم بررسي شد. خالص سازي نسبي آنزيم با استفاده از روش كروماتوگرافي تعويض يوني با سفادكس DEAE A50 انجام و پارامترهاي كينتيكي فعاليت آنزيم بررسي شد. در اين مطالعه پارامترهاي كينتيكي از قبيل Km و Vmax محاسبه شدند. نتايج: اندازه گيري فعاليت آنزيم در زمان هاي مختلف كشت نشان داد كه بيشترين ميزان توليد آنزيم پراكسيداز 72 ساعت بعد از كشت باكتري بدست مي آيد.

Aims: Peroxidases are used in a wide range of biotechnological processes, most of which are carried out at high temperatures and high pH levels. Since most of the commonly used peroxidases are unstable and inactive in alkaline conditions and high temprature, it is necessary to find thermoalkalophilic peroxidases for practical purposes. Materials and Methods: In this study, extracellular production of peroxidase in the native strain Bacillus tequilensis was studied. for this purpose, Enzyme activity was evaluated using two substrates 2,4-DCP and pyrogallol in bacterial liquid culture and the effect of culture time on enzyme production, as well as the effect of parameters such as pH and temperature on enzyme activity investigated. The relative purification of the enzyme was performed using ion exchange chromatography with sephadex DEAE A50 and the kinetic parameters of enzyme activity were evaluated. In this study, kinetic parameters such as Km and Vmax were calculated. Results: Measurement of enzyme activity at different times of culture indicated that the highest amount of peroxidase production was obtained 72 h after bacterial culture.